论文部分内容阅读
双因子调控体系在鞭毛形成、趋化性、游动性、生物膜的形成、群体感应、致病性的调控,以及转录调控等多方面均发挥着重要作用。本文完成了双因子调控体系中几个全长基因(I、W、V、P、S3)的表达、蛋白纯化及晶体初步摸索工作。
作为双因子调控体系的一部分,趋化系统控制着细菌白身运动方向,从而对有益或有害化学信号的梯度变化做出响应。两组跨膜蛋白复合物参与了细菌对外界环境和自身生理信号的感应、增益和反馈控制。CheW是第一组复合物中的重要因子。它与CheA和MCP结合,在细胞极点上对稳定MCP-CheA的结合起到了至关重要的作用。它还可以与CheW-CheA复合物竞争受体的结合位点,从而破坏CheA-CheW-MCP三元复合物的稳定。过表达或敲除CheW都会缺失趋化表型。因此,人们认为CheW是将MCP信号传递给CheA的支架蛋白。
本文完成了来源于腾冲嗜热菌Thermoanaerobacter tengcongensis中支架蛋白CheW(TtCheW)的表达、纯化、晶体生长及优化工作,收集到一套2.2A分辨率的衍射数据,并利用分子置换法解析了TtCheW的晶体结构。这是第一个高分辨率CheWfree态的晶体结构。
根据已有的来源于Thermotogamaritima(Tm)的CheAP4-P5-CheW复合物晶体结构,我们模拟了TmCheAP4-P5-TtCheW结构模型,推测TtCheW与TmCheW可能采用相似的疏水相互作用方式各自与CheA结合。发现在CheW上存在一个保守motif“NxxGxIxP”,对CheW-CheA的结合起了重要作用。我们根据已有的CheW单点突变实验和对TtCheW分子中蛋白质相互作用区域预测,推测TtCheW与MCP的结合区域位于我们构建的复合物结构模型中TtCheW和CheAP4domain结合所产生的凹槽内。