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研究背景及目的胰腺癌起病隐匿、死亡率高,现有的检验及检查方法难以满足临床诊断需要。目前最常用的PDAC诊断标志物CA19-9对早期患者诊断率较低,且易受黄疸等因素的影响。所以我们迫切地需要新的新的肿瘤标志物来辅助胰腺癌的诊断。肿瘤细胞分泌的外泌体可含有肿瘤特异性表达的核酸及蛋白质,所以我们有望通过检测胰腺癌患者外周血的外泌体成分,达到辅助胰腺癌诊断的效果。miRNA是一种小的非编码RNA,它能够靶向多个mRNA,抑制其翻译或使其降解。一些研究报道了miRNA参与了胰腺癌的增殖、迁移、侵袭、转移和化疗耐受等过程。miRNA同时具有致癌因子和肿瘤抑制因子的功能。既往研究也发现,肿瘤组织的miRNA表达与正常组织是存在差异的。所以我们认为胰腺癌患者外周血中外泌体miRNA与健康人之间可能也存在差异,而这种差异有望辅助我们对胰腺癌做出诊断。虽然外泌体用于胰腺癌诊断的相关研究已经取得了一定进展,但是整体上研究数量仍较少。本研究以外周血外泌体miRNA为研究对象,希望从中找到可用于胰腺癌诊断的生物标志物,能够更好的辅助胰腺癌的临床诊断。研究方法于2017年6月至2018年6月,本研究纳入患者141例,排除掉病理检查不符合要求及样本溶血的标本后,剩余PDAC和慢性胰腺炎患者共90例,分为训练组和验证组。其中训练组包含PDAC患者27例(其中转移性PDAC 11例),慢性胰腺炎15例;验证组包含PDAC30例(其中转移性PDAC 12例),慢性胰腺炎18例。收集患者的外周血标本后,通过离心的方法完成血浆的分离和外泌体的纯化,然后从外泌体中提取miRNA并对其进行测序。将所有样本的miRNA表达进行标准化。根据所有患者的miRNA标准化表达水平建立贝叶斯网络,识别出与PDAC诊断及预后潜在相关的血浆外泌体miRNA。通过受试者工作特征曲线分析单个miRNA或成对miRNA对训练组PDAC的诊断价值,选出诊断价值高的miRNA在验证组中进行验证。同时收集患者预后资料,找出与患者预后相关的miRNA。研究结果对于分离和提纯的外泌体,我们用电子显微镜及Western blotting方法从形态学及蛋白标志物方面对其进行了鉴定。实验提取的miRNA浓度也达到了我们研究的需要。根据miRNA在不同样本中的表达量,我们绘制了贝叶斯网络。本研究结果形成的贝叶斯网络由337个节点和713条边组成。在贝叶斯网络中,miR-95-3p存在于胰腺导管腺癌下游,miR-26-5p存在于慢性胰腺炎上游,而miR-95-3p/miR-26-5p的比值对于训练组中PDAC的诊断敏感性为81.5%,特异性为93.3%;在验证组中其的敏感性和特异性分别为86.7%和100%。miR-335-5p/miR-340-5p作为生物标志物来区分转移与非转移胰腺导管癌患者,其在训练组的AUC为0.798,在验证组中的AUC为0.801;结合了患者生存期数据后,miR-335-5p/miR-340-5p的比值低于0.15的患者,相对于高于0.15的患者,其中位生存期要明显延长(412天vs 207天,P=0.0200)。结论本研究通过血浆外泌体miRNA表达量形成了贝叶斯网络,从中识别出可用于PDAC的诊断和预后判断miRNA生物标志物,其中miR-95-3p/miR-26-5p的比值可用于辅助PDAC的临床诊断;而miR-335-5p/miR-340-5p的比值可辅助转移性PDAC的诊断以及患者预后的判断。