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阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)，俗称老年性痴呆(senile dementia)，是一种和老化相关的神经退行性疾病。随着我国人口在上世纪末提前进入老龄化，老年性痴呆已经继心脏病、肿瘤和脑卒中之后成为第四位的死亡原因。目前，对该病的诊断和治疗没有理想的药物。 本研究利用Fmoc法合成的老年性痴呆的致病抗原-β淀粉样蛋白之一Aβ40多肽及其氨基端第一到第十六个氨基酸残基片段Aβ16作为抗原，从一个来自于人类抗体可变区基因构建的单链抗体噬菌体展示的表达文库中筛选老年性痴呆抗体。经过5轮的扩增-吸附-洗脱，分别对Aβ16、Aβ40特异的噬菌体抗体进行了富集。从随机挑选的53和55个克隆中发现了8个和33个侯选克隆。其中，针对Aβ40的10个侯选克隆经过对抗原Aβ40的竞争性ELISA测试，发现抗原Aβ40对它们的抑制率达到50％以上，确定为阳性克隆。另外，Aβ16能对其中5个阳性克隆的抗原结合活力的抑制率达到50％以上，确认抗体对抗原的结合位于氨基端第一到第十六个氨基酸残基表位上。 通过设计特异的引物，应用PCR方法，将其中4个阳性克隆的单链抗体基因从噬粒pHEN1上扩增，克隆到测序载体pGEM T easy中。利用通用引物测序，得知Aβ40特异的人单链抗体基因由968个核苷酸组成。推导得到的Aβ40特异单链抗体氨基酸序列具有相应的人抗体重链和轻链可变区的典型特征，互补决定区和框架区的氨基酸结构被区分出来。抗体基因序列的GenBank注册号为AF502169。通过Blast分析发现，重链可变区基因和14-NT010168.11的同源性达到97％，轻链可变区基因和22-NT011520.8的同源性达到100％，可以肯定Aβ40特异抗体的基因分别来自人类染色体的14和22号染色体上。这和已知的抗体基因来源相一致，轻链的类型属于λ型。和同一文库筛选得到的其它抗原的单链抗体相比较，可见不同的单链抗体氨基酸的变异主要出现在重链区域，提示抗体和抗原结合时重链可变区具有重要性。 适合于动物和临床试验诊断应用的老年性痴呆单链抗体的获得是本项研究的目的之一。本研究将单链抗体基因分别克隆到不同的原核表达载体中，包括pGEX-6P-1、pCANTAB5E和pET-22b(+)、pET-30a(+)。分别转化大肠杆菌BL21、XL-Bluel和BL21-Gold，通过一定浓度的IPTG诱导，得到GST融合的、带E-tag可溶性的和带His6-tag适合于直接标记99mTc的抗体表达，表达产物大小分别为55Kda、27Kda和32Kda。pET-22b-scFv-Aβ40在大肠杆菌表达后，对菌体的超声产物上清和沉淀分别采用了天然状态的和变性条件下的处理，最后过金属离子亲和层析柱并进行相应的