【摘 要】
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Musclin是一种骨骼肌衍生分泌因子,参与细胞糖代谢、脂肪代谢和胰岛素抵抗。目前对其功能的研究主要集中在小鼠和大鼠等模式生物上,而有关绵羊Musclin对糖代谢的研究尚未见报道。本试验旨在利用本课题组前期已构建的绵羊Musclin基因表达载体（pc DNA3.1-Musclin）,研究绵羊Musclin基因对绵羊肌细胞糖代谢和胰岛素作用的影响。试验一:运用生物信息学相关软件和网站预测绵羊Musc
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（31872438,31272527）； 山西省重点研发计划项目（201803D221022-4）； 山西农业大学中青年拔尖创新人才支持计划（BJRC201204）； 山西农业大学横向科技项目（2015HX12）；
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Musclin是一种骨骼肌衍生分泌因子,参与细胞糖代谢、脂肪代谢和胰岛素抵抗。目前对其功能的研究主要集中在小鼠和大鼠等模式生物上,而有关绵羊Musclin对糖代谢的研究尚未见报道。本试验旨在利用本课题组前期已构建的绵羊Musclin基因表达载体（pc DNA3.1-Musclin）,研究绵羊Musclin基因对绵羊肌细胞糖代谢和胰岛素作用的影响。试验一:运用生物信息学相关软件和网站预测绵羊Musclin结构特征。结果表明:Musclin基因在哺乳动物间同源性较高,属于保守基因。其蛋白含有一条27个氨基酸组成的信号肽,并在28氨基酸位点处存在一个酶切位点。亚细胞定位在胞外,属于分泌蛋白。其二级结构以α螺旋和无规则卷曲结构为主,属混合型蛋白。试验二:绵羊成肌细胞共分为四组:空载体组（pcDNA3.1）、Musclin过表达组（pc DNA3.1-Musclin）、空载体+胰岛素（80 n M）组（pc DNA3.1+Insulin）、过表达+胰岛素（80 n M）组（pc DNA3.1-Musclin+Insulin）。分别转染绵羊成肌细胞,转染6 h后,更换为含2%马血清的分化培养基诱导分化,并根据分组方案添加胰岛素或PBS。在48 h、72 h收集培养液和细胞,用于后续检测。通过荧光定量PCR检测相关基因的表达变化。结果表明,绵羊Musclin过表达明显减少了正常培养或胰岛素处理的绵羊成肌细胞葡萄糖摄取和糖原合成或加快了糖原分解。诱导分化72 h时,绵羊Musclin基因抑制了正常培养或胰岛素处理的绵羊成肌细胞中IRS1、AKT1、AKT2、GLUT1、GLUT4基因mRNA表达,并促进了GSK3βmRNA的表达;而诱导分化48 h时,只有GLUT4基因的表达受到影响。综上所述,绵羊Musclin基因过表达可以影响肌细胞糖代谢并减弱胰岛素的作用,二者相互协调以维持糖代谢稳态。其作用机制涉及到上述相关基因的表达变化,且与绵羊成肌细胞的分化状态有关。
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