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硝基呋喃类药物属于一类人工合成的抗生素,因为价廉易得,被广泛应用于水产养殖中的病害防治。硝基呋喃类药物在动物体内代谢迅速,但是其代谢物可在机体内稳定存在。水产品中的硝基呋喃代谢物残留严重威胁消费者的健康,因此,世界各国均把硝基呋喃类药物列入禁用渔药。目前,硝基呋喃代谢物LC-MS/MS方法已经建立,但是该方法需要昂贵的仪器和复杂的前处理,分析时间长、成本高,不便于现场分析。而ELISA检测方法具有快速简便、易于操作等优点,适合大样本筛查。本研究旨在探索同时检测多种硝基呋喃代谢物的分析方法,初步建立水产品中硝基呋喃代谢物残留的ic-ELISA检测方法。首先采用甲醇钠催化β-羟乙基肼和DMC缩合生成呋喃唑酮代谢物AOZ,然后对三种硝基呋喃代谢物AOZ、SEM、AHD进行羧基化衍生,并利用活性酯法依次将三种小分子抗原同HSA进行偶联,获得免疫原。而包被原的合成则采用混合酸酐法,将4-CPAOZ、4-CPSEM、4-CPAHD分别同OVA偶联。通过薄层色谱、紫外扫描、LC-MS/MS来鉴定半抗原、免疫原和包被原的合成,并通过紫外光谱扫描法计算了半抗原-载体蛋白的偶联比,测得4-CPAOZ、4-CPSEM、4-CPAHD与载体的偶联比为4:1,11:1,14:1。采用合成的免疫原(4-CPAOZ)4-(4-CPSEM)11-(4-CPAHD)14–HSA免疫新西兰大白兔,获得同时对4-CPAOZ、4-CPSEM、4-CPAHD具有选择性的抗血清,经过辛酸-硫酸铵盐析法纯化和透析脱盐处理后,获得了纯化的抗体,并利用棋盘法和ic-ELISA方法测定抗体的效价分别为1:16000、1:12000、1:16000。利用获得的多抗建立了ic-ELISA检测硝基呋喃代谢物的方法,通过棋盘法和顺序参数分析,对ELISA检测过程的几个重要参数进行优化,找出ELISA实验的最佳反应条件。NPAOZ的ic-ELISA标准曲线的线性回归方程为y=-42.5595 x+66.4298,R2=0.9866,线性范围为0.5~10 ng/mL。NPSEM的ic-ELISA标准曲线的线性回归方程为y=-65.0732 x+100.9356,R2=0.9842,线性范围为2~25 ng/mL。NPAHD的ic-ELISA标准曲线的线性回归方程为y=-61.5168 x+95.4171,R2=0.9879,线性范围为2~25 ng/mL。空白桂花鱼样品的加标回收实验表明,回收率介于80%~120%之间,且变异系数均小于15%,表明该方法适合进行水产品中硝基呋喃代谢物的检测分析,为进一步的商用试剂盒开发建立了良好的研究基础。