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目的 采用拔除大鼠左侧上颌全部磨牙建立咬合力丧失的动物模型,旨在模拟口腔修复临床上常见的牙列缺损和牙列缺失病例,更加贴近于人的实际患病情况。检测该模型牙周膜韧带细胞中的多种细胞因子浓度的变化,模拟人在病理状况下牙周膜韧带的状态,从而探讨牙周膜的损伤程度和机制,了解细胞因子浓度变化所表达的意义,以期在细胞水平上对临床治疗提供参考。 材料与方法 1.动物分组 选用Wistar大鼠建立咬合力丧失的动物模型,按照正常及拔牙后6小时、24小时、48小时、72小时、1周、2周、3周、4周随机分组。 2.组织标本制备 实验动物处死,取出下颌骨,仅保留磨牙区骨段,分成两组分别保存,用于免疫组化和RT-PCR染色。 3.SP免疫组化染色 采用两步法,严格按照SP试剂盒说明书程序操作,iNOS抗体的工作浓度为1:100。 4.RT-PCR技术检测 Trizd法提取冻结组织中总RNA,260nm,280nm波长紫外光下测得RNA的含量和纯度。引物设计:PrimerA(bp2541):5’-GAGCGAGTTGTGGATTGTTC-3’;PrimerB(bp2965 C):5’-TAGGTGACCACAGCCACAGT-3’。扩增片段长度是425bp,Tm55℃。以β-actin作为参照,上游:5‘-TTACCGTGCGTGTCTTCTGG-3’;下游:5’-GATGGCTTGAAGACGTGTCT