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双峰驼是体格最大、寿命最长、生活环境较为特殊的草食家畜之一,骨骼肌又是机体重要动力器官。经国内外长期科研探索骨卫星细胞已在多种动物以及人类群体中成功建立模型,双峰驼为我国特有的经济生产牲畜,至今仍未有对其骨骼肌卫星细胞进行系统研究。深入了解双峰驼骨骼肌卫星细胞、骨骼肌调控机制对增肉、增产方面具有潜在意义。本实验以阿拉善双峰驼骨骼肌组织为样本材料,对肌肉样本进行超薄切片处理使用场发射透射电子显微镜对肌肉样本进行拍摄,并寻找肌膜与基底膜之间的骨骼肌卫星细胞;采取组织块培养法培养原代,结合差速贴壁法纯化原代骨骼肌卫星细胞,通过生长曲线分析确定卫星细胞的增殖模式;对骨骼肌卫星细胞中特异性基因PAX7用免疫荧光标记法经过激光共聚焦成像鉴定;使用PCR扩增方法对样本进行PAX7,MYF5,Desmin基因检测;对卫星细胞进行诱导培养后使卫星细胞进行成肌分化诱导骨骼肌卫星细胞发育为肌管结构。通过上述方法旨在获得较纯的阿拉善双峰驼骨骼肌卫星细胞,并对卫星细胞机理形态进行相关研究。实验结果如下:(1)对三至六月龄双峰驼股二头肌肌肉样本进行透射电子显微镜拍照研究,于肌肉组织的肌膜与基底膜之间分别找到激活态与未激活态的骨骼肌卫星细胞。观测到卫星细胞形态呈椭圆形,截面长约5-10um,宽度约为4-7 um。激活态的卫星细胞形状不固定,胞体被不完整包被有部分细胞胞体突破肌膜,其截面以及体积略大于未激活态卫星细胞。激活态的卫星细胞内有大量电子戎积物贴于骨骼肌卫星细胞细胞膜内部,较之未激活态卫星细胞细胞膜形状固定内部线粒体明显少于激活态卫星细胞细胞且内部电子戎机物分散较少,两者卫星细胞胞体内部具无线粒体外明显细胞器;(2)针对三至六月龄双峰驼进行肌肉采样,通过两种培养方法进行原代骨骼肌卫星细胞培养并进行比较。结果显示组织块培养法较两步酶细胞培养法更加适合远距离采样后的无菌原代细胞分离,最终产出细胞活性较强,不易污染,培养周期较长,更适用于双峰驼卫星细胞的体外培养;(3)通过免疫荧光染色与PCR扩增方法对传代细胞进行鉴定。结果经抗体PAX7孵育后的样本在激光共聚焦显微镜下观察呈阳性,染色过后的亮斑集中而密集占有当前培养平板大部,证明细胞纯度达到80%,PCR扩增后显示PAX7,MYF5,Desmin基因均有相应条带,最终证明体外培养细胞为纯度较高的骨骼肌卫星细胞;(4)对前期培养的骨骼肌卫星细胞进行诱导分化,使用分化培养基进行骨骼肌卫星细胞进行成肌诱导。在更换诱导培养基后48小时后卫星细胞开始初步分化卫星细胞胞体明显拉长由短梭型转变为长条状,在更换培养基后一周时长后卫星细胞呈现明显分化状态长条状的卫星细胞明显聚集成束,可以观测到明显的肌管雏形构造。