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目的:研究吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)介导免疫逃逸在小鼠肺癌原位移植肿瘤生长中的作用。从免疫逃逸角度揭示肺癌发病“正气亏虚”的生物学本质和金复康口服液治疗肺癌的作用机制。 方法: 1.首先建立IDO基因转染的小鼠肺癌细胞稳株:2LL-EGFP-IDO细胞株。分别从细胞和分子水平进行验证其稳定性。 2.将2LL-EGFP-IDO细胞直接种植到小鼠肺脏。采用观察生存期的方法比较原位造模方法与皮下移植模型的不同。 3.金复康干预IDO基因转染的Lewis肺癌小鼠生存期和肿瘤生长情况的研究。建立稳定的小鼠肺癌原位移植模型后,将小鼠随机分为4组,模型组、金复康组、1-MT组和紫杉醇组,每组12只。给药时间为造模后第2天,其中每组5只用于活体成像检测,共给药12天。7只观察生存期,给药直至小鼠自然死亡。 4.金复康对IDO介导免疫逃逸小鼠原位肺癌的作用机制研究。建立稳定的小鼠肺癌原位移植模型后,(1)将小鼠随机分为4组,空白组、模型组,金复康组和1-MT治疗组,每组15只。给药时间为造模后第2天,分别于药物干预后4、8、12天各组处死5只小鼠进行流式细胞术检测脾脏中T细胞比例。(2)将小鼠随机分为4组,空白组、金复康高、低剂量组和1-MT组,从造模后第2天开始给药,给药12天后处死取小鼠肺部肿瘤组织进行PCR、Western blot检测 5.金复康口服液的药物代谢研究。采用色谱、质谱方法检测金复康口服液煎剂和尿中代谢产物,在水煎液和给药后尿液中存在而在空白尿液中不存在的色谱峰所对应的化合物则认为是金复康口服后吸收入体内的化学成分。 结果: 1.建立了稳定表达IDO基因的小鼠肺癌细胞稳株。2LL-EGFP-IDO细胞在蛋白和基因水平上均能稳定表达IDO。 2.建立了稳定的小鼠肺癌原位移植模型。其中,小鼠肺癌原位移植瘤小鼠的生存期为15.00±1.00天,而皮下移植瘤小鼠的生存期达到31.40±4.56天,两者存在显著性差异(p=0.002)。 3.金复康可控制肺癌的增殖,延长生存时间。活体成像结果表明,与模型组相比,金复康(p<0.01)可抑制肿瘤的生长。生存期比较发现,与模型组相比,金复康(p<0.0001)可延长小鼠生存期。 4.金复康对外周T细胞比例调节作用研究发现,与模型组相比,金复康对细胞毒性T细胞在给药后第4天(p<0.01)、第8天(p<0.001)及第12天(p<0.05)均能有显著的升高作用;对CD4+CD25+T细胞的表达,金复康在给药后第4天(p<0.05)、第8天(p<0.005)及第12天(p<0.01)均有抑制作用;对Foxp3+T细胞的表达,金复康在给药后第4天(p<0.01)、第8天(p<0.001)及第12天(p<0.001)均有抑制作用。金复康对瘤体中IDO表达研究发现,高低剂量金复康均能够在蛋白和基因水平上抑制肺癌小鼠肿瘤IDO表达。 5.金复康代谢产物(尿液)中的主要成分为黄酮类成分、皂苷类成分以及丹酚酸B,齐墩果酸,熊果酸以及异欧前胡内酯等。 结论:IDO介导的免疫逃逸可能是肺癌免疫逃逸的重要机制,金复康通过调控IDO从而干预其介导的免疫逃逸反应,揭示扶正方药金复康口服液的作用机制,从而揭示了机体正气亏虚的科学基础。