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目的:通过脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激角膜基质细胞诱导其炎症反应,并测定microRNA-21(miR-21)在炎症反应中的表达,并揭示miR-21对角膜基质细胞炎症反应的调节作用及机制。方法:1.应用LPS诱导角膜基质细胞炎症反应,并通过实时定量PCR(realtime PCR,qPCR)的方法检测人角膜基质细胞在炎症反应中炎性细胞因子以及miR-21的表达变化。2.增强或抑制miR-21的表达,并观察人角膜基质细胞炎症反应的变化。2.1)藉由脂质体将hsa-miR-21agomir转染细胞以过表达miR-21,检测过表达miR-21对角膜基质细胞炎症反应的影响。通过qPCR检测miRNA-21 mRNA的表达,通过qPCR、Elisa检测IL-6、IL-8在mRNA及蛋白分水平的表达,并结合CCK8检测及细胞迁移实验检测过表达miR-21对角膜基质细胞增殖及细胞迁移的影响。2.2)转染hsa-miR-21antagomir以抑制miR-21的表达,检测抑制miR-21表达对角膜基质细胞在炎症反应的影响。通过qPCR检测miRNA-21 mRNA的表达,通过qPCR、Elisa检测IL-6、IL-8在mRNA及蛋白分水平的表达,并结合CCK8检测抑制miR-21表达对角膜基质细胞增殖的影响。3.基因软件分析确定miR-21在人角膜基质细胞炎症反应中发挥作用的靶点,qPCR检测miR-21靶基因PTEN、PDCD4在角膜基质细胞中的表达。结果:1.CCK8实验结果表明,以正常对照组角膜基质细胞存活率为100%。0.5ug/mlLPS 组(90.7±2.84)% 、1ug/mlLPS 组(82.6±3.25)% 、2ug/mlLPS组(52.6±4.25)%、5ug/mlLPS组(39.6±1.53)%,总体差异有统计学意义(F=82.8,P<0.001)。组间两两比较后,选择1μg/mlLPS构建炎症模型。2.LPS刺激角膜基质细胞,miR-21表达显着增加,且具有剂量依赖性(P<0.001)。3.1)将hsa-miR-21agomir转染人角膜基质细胞24h、48h后,miR-21表达显著升高(P<0.001)。qPCR及Elisa检测显示,与阴性对照组相比,转染组的IL-6、IL-8的表达显著降低(P<0.001)。CCK8及迁移实验表明细胞增殖活性及迁移速度较阴性对照组显著提高(P<0.001)。3.2)将hsa-miR-21antagomir转染人角膜基质细胞后,miR-21表达显著减少(P<0.001)。qPCR及Elisa检测显示IL-6、IL-8表达增高(P<0.001)。CCK8实验表明细胞增殖活性较阴性对照组降低(P<0.001)。4.相关软件预测PDCD4及PTEN为miR-21的潜在靶基因,qPCR结果证明过表达miR-21下调PDCD4、PTEN的表达;抑制miR-21表达上调PDCD4、PTEN的表达。结论:1.miRNA-21在LPS激活的人角膜基质细胞炎症反应中表达显著升高2.过表达miRNA-21可以显著抑制LPS诱导的人角膜基质细胞炎性因子的高表达,同时过表达miRNA-21可促进细胞增殖、迁移。3.miR-21可能通过调控靶基因PTEN及PDCD4的表达,对角膜基质细胞的炎症反应进行调节。