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多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族（全称UDP-N-acetyl-D-galactosamine: polypeptide N-acetylgalactosaminyltransferase Family；简称O糖基转移酶家族/ppGalNAc-Ts）能将N-乙酰氨基半乳糖（GalNAc）结合到蛋白质肽链的Ser或Thr上，是催化蛋白质O-糖基化修饰的起始糖基转移酶。人体中的ppGalNAc-T为一家族酶，其酶活性由1967年被首次报道，迄今己发现有20个成员。它们在人体组织中的分布和体外多肽糖基化修饰的底物专一性都存在着差异。ppGalNAc-T可作为肿瘤标志物，如ppGalNAc-T6是乳腺癌的标志分子，ppGalNAc-T13是成神经细胞瘤的标志基因。最新研究发现ppGalNAc-T14调控死亡受体Apo2L/TRAIL的糖基化修饰, ppGalNAc-T14的过表达能显著促进细胞的凋亡。 通过Blast搜索，在我们前期研究中发现一个与ppGalNAc-T10相似的EST序列，克隆出其ORF，命名为ppGalNAc-T20。ppGalNAc-T20蛋白为Ⅱ型膜蛋白，氨基酸序列包含ppGalNAc-T家族的所有基序（Motif）。对ppGalNAc-T家族的进化树分析发现，ppGalNAc-T20与ppGalNAc-T10在氨基酸水平的近似程度高达70.7％，与其他ppGalNAc-T相比更为接近；而之前对ppGalNAc-T10的研究发现，其在体外对未经糖基化修饰的Muc1a、Muc5AC、Muc7、EA2等底物不具有酶活性，而对已糖基化的底物表现出很高的酶活性；它是典型的具有二级酶活性的ppGalNAc-T。 相对于ppGalNAc-T10在体内广泛分布于下颌腺、睾丸、小肠、结肠、卵巢、心脑子宫等组织，ppGalNAc-T20只在脑部和睾丸组织检测到有较高的分布。为进一步研究ppGalNAc-T20的功能，在本课题研究中设计了ppGalNAc-T20抗原，成功制备得到了ppGalNAc-T20多克隆抗体。该抗体具有极高的特异性和灵敏性，其与其他ppGalNAc-Ts不发生交叉反应。ppGalNAc-T20抗体的获得为研究其生物学功能提供了强有力的工具。 本文通过研究发现，ppGalNAc-T20具有ppGalNAc-T10接近的进化树位置和不同的酶活特性，并通过体外实验证明其对未被糖基化修饰的底物不具有一级酶活，而对糖基化修饰过的底物具有二级酶活。同时我们还构建了ppGalNAc-T20全长酶在不同截短方式下的真核质粒载体，并检测了所分泌出不同截短方式的ppGalNAc-T20蛋白酶活性；发现不同的截短方式对ppGalNAc-T20蛋白酶活性及表达稳定性的影响，并使用SWISS-MODEL软件对ppGalNAc-T20蛋白质结构进行了预测，从蛋白质的稳定性及酶活性的角度对ppGalNAc-T20展开了研究。 我们也成功制备了ppGalNAc-T20的多克隆抗体。经检验，该抗体特异性好，灵敏度高，不和其它ppGalNAc-Ts发生交叉反应，为研究ppGalNAc-T20的功能提供了有力的工具。同时也制备了ppGalNAc-T10的多克隆抗体。利用制备的抗体进行组织检测，验证了ppGalNAc-T20在睾丸组织与脑组织中高表达，为选择合适的细胞株作为其功能研究的对象指明了方向。 本论文对ppGalNAc-T20这一新基因做了以上初步研究，为今后进一步研究ppGalNAc-T20的生物学功能奠定了基础。