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第一部分 以聚β-羟基丁酸酯为载体的大鼠肾上腺皮质细胞移植实验研究 目的:探索以可生物降解材料聚β-羟基丁酸酯(PHB)为细胞载体进行肾上腺细胞移植治疗肾上腺皮质功能不全的可行性。 方法:Wistar大鼠肾上腺皮质细胞体外分离培养,在不同时间点(3,6,9天)加入浓度为100mIU/mL的ACTH,收集培养上清液检测醛固酮含量;加入不同浓度的ACTH,收集培养液检测醛固酮水平。将不同来源的肾上腺细胞与脾细胞和(或)植物血凝素(PHA)混合培养,通过观察脾细胞增殖水平间接反应肾上腺细胞的免疫原性。利用PHB作为细胞载体进行肾上腺皮质细胞移植,体外观察PHB对培养的大鼠肾上腺细胞增殖,激素分泌功能的影响。将种植了大鼠肾上腺细胞的PHB植入双侧肾上腺已切除的模型大鼠体内,观察细胞移植后受鼠体内激素水平的动态变化及局部组织学变化和超微结构的变化。 结果:大鼠肾上腺皮质细胞可以在体外分离培养,随着培养时间的延长,上清液醛固酮水平逐渐下降;加入ACTH后,醛固酮水平显著升高(3,6,9天时分别为:37.01+8.64μmol/L VS 92.24±42.36μmol/L、31.35±7.53μmol/L VS142.31±46.12μmol/L、13.71±5.76μmol/L VS 246.84±48.14μmol/L,P<0.05);肾上腺细胞对ACTH的反应能力逐步增强。(2.73±1.40 VS 4.94±2.15 VS 21.38±9.87,P<0.05);自体、同种异体、异种来源的大鼠肾上腺细胞免疫原性相仿(0.13±0.02 VS0.11±0.03 VS 0.14±0.03,P>0.05);其增殖明显低于脾细胞和经PHA刺激的脾细胞(0.52±0.02 VS 0.75±0.01,P<0.05)。大鼠肾上腺细胞可以在PHB上生长。在体外PHB对大鼠肾上腺细胞增殖功能无影响(1.87±0.03 VS 1.91±0.04,P>0.05)。对大鼠肾上腺细胞激素分泌功能无影响(36.43±3.65μmol/LVS 31.72±2.49μmol/mL,P>0.05)。实验组大鼠生存时间较双侧肾上腺切除组的大鼠长,实验组大鼠体内激素水平比单纯双侧肾上腺切除组的激素水平高,两者差别有显著性。PHB材料植入体内2周后可见较多炎性细胞浸润,有大量纤维结缔组织包绕。随着时间延长,炎性细胞逐渐减少,纤维结缔组织逐步消散,材料逐步降解,血管长入。免疫组织化学研究表明移植的。肾上腺细胞在体内未引起明显的排斥反应;超微结构观察显示移植的肾上腺细胞保持着旺盛的分泌功能。 结论:大鼠肾上腺皮质细胞可以在体外分离培养,随着培养时间的延长,’肾上腺细胞的基础分泌功能逐渐下降,应激分泌功能逐渐增强;’肾上腺细胞的免疫原性很弱,并可抑制免疫排斥反应;PHB对肾上腺细胞的生长、增殖、分泌功能无影响;肾上腺细胞以改性的PHB为载体植入体内可存活,并在一定时间内保持分泌功能,能够满足或部分满足大鼠体内的激素要求;PHB在体内逐步降解,以PHB为载体的肾上腺细胞移植治疗肾上腺皮质功能不全具有可行性。