论文部分内容阅读
亚硝酸盐可将血液中正常携氧的低铁血红蛋白氧化成为高铁血红蛋白,致使低铁血红蛋白失去携氧能力,出现组织缺氧现象。摄入过量亚硝酸盐会引起中毒反应,重者将导致死亡。同时,亚硝酸盐还是一种致癌物质。据研究,人体内亚硝酸盐的含量与食道癌的发病率呈正相关性。目前,亚硝酸盐的致癌机理被认为是亚硝酸盐在胃酸环境下,与食物中的仲胺、叔胺和酰胺等物质反应,产生了强致癌物N-亚硝胺。豆豉是我国传统发酵豆制品,由于独特的加工工艺,使其富含微生物群,因此我们尝试从豆豉中筛选出可降解亚硝酸盐的细菌。从湖南豆豉样品中筛选出的12株细菌均为革兰氏阳性菌,且呈过氧化氢酶阳性和溶菌酶阳性,经16Sr DNA分子鉴定,所筛菌株分别属于不动杆菌(Acinetobacter guillouiae)及芽孢杆菌(Bacillus)。由生长曲线可知,全部细菌在4 h后进入对数生长期,Acinetobacter guillouiae NDS2、Acinetobacter bereziniae NDS4、Bacillus subtilis subsp.spizizenii NDS6、Bacillus amyloliquefaciens NDS7、Bacillus licheniformis NDS8、Bacillus methylotrophicus NDS9、Bacillus aryabhattai NDS10在16 h左右时率先完成对数期,进入稳定阶段。而Bacillus subtilis subsp.spizizenii NDS1、Bacillus tequilensis NDS3、Bacillus subtilis subsp.subtilis NDS5、Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum NDS11、Bacillus subtilis NDS12则在28 h左右进入稳定期,且菌体数量峰值高于其他菌株。从菌株在添加和未添加亚硝酸钠的培养基中的生长情况可以看出菌株整体偏好生存于具有亚硝酸盐的环境中,只有Bacillus subtilis subsp.spizizenii NDS6和Bacillus subtilis NDS12的生长不受亚硝酸盐影响。亚硝酸盐还原能力测定结果表明所筛菌株均可降解亚硝酸盐。Bacillus subtilis subsp.spizizenii NDS1、Acinetobacter guillouiae NDS2、Bacillus tequilensis NDS3、Bacillus subtilis subsp.Subtilis NDS5、Bacillus amyloliquefaciens NDS7、Bacillus subtilis NDS12可在48 h之内降解93%以上的亚硝酸钠,其中48 h时Bacillus subtilis subsp.spizizenii NDS1的降解率可达到99.41%。但Acinetobacter bereziniae NDS4、Bacillus licheniformis NDS8、Bacillus methylotrophicus NDS9、Bacillus aryabhattai NDS10在48 h内的降解率无法超过50%。亚硝酸盐还原酶活性测定结果显示,在24 h时Bacillus subtilis subsp.Subtilis NDS5的酶活最低,为4.25 U/m L,而Bacillus tequilensis NDS3的酶活为67.27 U/m L,活力最强。48 h时Bacillus methylotrophicus NDS9表现出最小酶活,为21.88 U/m L,此时Bacillus subtilis subsp.spizizenii NDS1的酶活最高,为111.75 U/m L。这一结果与亚硝酸盐还原能力的测定结果一致。在此基础上,根据一株芽孢杆菌Bacillus subtilis subsp.168中nas D基因序列设计引物,扩增出12株细菌的亚硝酸盐还原酶基因,将凝胶板上出现的单一清晰条带割胶回收、测序并在BLAST上比对后发现,所得序列与亚硝酸盐还原酶序列同源性高于97%。随后,将12株细菌接入浆水芹菜,研究其对于浆水芹菜中亚硝酸盐含量变化的影响,结果表明,与对照相比,接入Bacillus subtilis subsp.spizizenii NDS1、Acinetobacter guillouiae NDS2、Bacillus tequilensis NDS3、Acinetobacter bereziniae NDS4、Bacillus subtilis subsp.Subtilis NDS5、Bacillus subtilis subsp.spizizenii NDS6、Bacillus amyloliquefaciens NDS7、Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum NDS11、Bacillus subtilis NDS12的浆水芹菜在5天后不能测出亚硝酸盐。