苏云金芽孢杆菌的重要功能基因

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害虫抗性问题已经成为苏云金芽孢杆菌的重要研究课题。不少研究者在寻找新的苏云金芽孢杆菌主要杀虫基因—cry。PCR-RFLP技术已被证实可以快速分析鉴定苏云金芽孢杆菌菌株的cry和cyt基因型。本研究在继承前人已经成功建立的cry1-cry4、cry7、cry9和cry10鉴定体系基础上,发展了cry5、cry6、cry8和cry11的PCR-RFLP鉴定体系,进而采用上述PCR-RFLP技术鉴定了苏云金芽孢杆菌6株标准菌株和30株武夷山分离株的cry1-cry11基因类型。结果发现,88.9%、61.1%和2.8%的菌株分别含有cry1、cry2和cry11类基因,从供试菌株中检测到22种cry基因亚型(cry1Aa、cry1Ab、cry1Ac、cry1Ad、cry1Ba、cry1Cb、cry1Db、cry1Ea、crylEb、cry1Fa、cry1Fb、cry1Ga、cry1Gb、cry1Ka、cry1La、cry1Ia、cry1Ib、cry2A6、cry2Ac、cry2Ad、cry2Ae和cry11Aa)。然而,所有供试菌株均未检测到cry3、cry4、cry5、cry6、cry7、cry8、cry9和cry10基因型。第一代转基因棉花主要含有cry1Ac。然而多种害虫已经对苏云金芽孢杆菌产生抗性,而鳞翅目重要害虫小菜蛾在田间条件下已经对Cry1Ac产生了抗性。由于cry2Ab与cry1Ac序列同源性较低,两者不大可能产生交互抗性,国外学者已经以cry2Ab基因为基础获得第二代转基因棉花。目前,苏云金芽孢杆菌内毒素基因国际命名委员会网站(http://www.lifesci.sussex.ac.uk/home/Neil_Crickmore/Bt/)共报道了7个cry2Ab基因和1个cry2Ad基因。本研究从武夷山分离株WB2和WB10中分别克隆到一个cry2基因(已被苏云金芽孢杆菌内毒素基因国际命名委员会命名为cry2Ab8和cry2Ad2)。cry2Ab8全长1902bp,编码633aa,所推导的氨基酸序列与已知的Cry2Ab基因氨基酸序列同源性最高达99.5%,与所有已知的Cry2Ab相比存在3个氨基酸的差异(Ala411Val、Ile629Leu和Ser630Pro)。cry2Ad2全长1902bp,编码633aa,所推导的氨基酸序列与Cry2Ad1氨基酸同源性最高(99.4%),有4个氨基酸的差异(Asn10Thr、Ser354Pro、Ile629Leu和Ser630Pro)。 苏云金芽孢杆菌自1901年被发现以来,一直缺乏有效的抗病基因资源。最近,研究人员发现在苏云金芽孢杆菌中存在一种抗病基因aiiA,其表达产物AiiA能减弱欧文氏菌导致的软腐病危害。为了有效利用这种新型抗病基因资源,本研究利用PCR技术初步研究了aiiA基因在芽孢杆菌中的分布情况。结果表明:在5株苏云金芽孢杆菌标准菌株、29株苏云金芽孢杆菌武夷山分离株、3株蜡质芽孢杆菌标准菌株和1株枯草芽孢杆菌分离株中均含有aiiA基因。将来自3株苏云金芽孢杆菌武夷山分离株、2株蜡质芽孢杆菌标准菌株和BS-1的aiiA进行分子克隆。在线核苷酸序列BLAST
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