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肌肉生成抑制素基因(myostatin，MSTN)，又称生长分化因子-8(GDF-8)，是转化生长因子β(TGF-β)超家族成员之一，最初从小鼠骨骼肌cDNA文库克隆得到。MSTN基因“敲除”的超级鼠及双肌牛的研究证明该基因是骨骼肌发育的负调控因子。
RNA干扰(RNAi)是近几年发现的在自然界广泛存在的由dsRNA介导的特异性阻断相应基因表达的现象，属于转录后基因沉默。目前已经成为一种新的研究特定基因功能的技术手段。
本试验以鸡为作为动物模型，研究MSTN调节骨骼肌发育的分子机制，设计并构建了含有MSTN的RNAi双元表达载体pEGFP-N1-MSTN<,1>-MSTN<,2>，以在体内转录出含有MSTN基因发夹结构的dsRNA，发挥干扰MSTN蛋白表达的作用。
试验Ⅰ利用BLAST 2 SEQUENCE软件将本实验室已经扩增出的大骨鸡肌肉组织myostatin基因全部cDNA序列与GenBank中myostatin基因进行同源性比对，找到其保守序列，然后利用primer primer 5.0程序自行设计了一对引物，按照5’端所加酶切位点的不同，由(大连)宝生物公司合成两对引物。通过PCR扩增出两条长度均为393bp的相同DNA片段，将其分别命名为MSTN-1和MSTN-2。将MSTN-1和MSTN-2进行TA克隆，并将通过菌落PCR和单、双酶切鉴定的克隆分别命名为pMD-MSTN-1和pEGM-MSTN-2。对pMD-MSTN-1和pEGM-MSTN-2序列测定后与GenBank中myostatin基因核苷酸序列进行同源性分析，结果表明扩增出的大骨鸡肌肉组织myostatin基因核苷酸序列同已知myostatin序列同源性为100％。双酶切pMD-MSTN-1与中间载体pHANNIBAL后将MSTN-1与中间载体pHANNIBAL连接，双酶切鉴定，将鉴定正确的克隆命名为pHAN-MSTN<,1>。双酶切pHAN-MSTN<,1>与pEGM-MSTN-2后回收并连接相应片断，双酶切鉴定，将鉴定正确的克隆命名为pHAN-MSTN<,1>-MSTN<,2>。双酶切pEGFP-N1和pHAN-MSTN<,1>-MSTN<,2>，回收相应片断、连接构建RNAi双元表达载体，将单、双酶切鉴定正确的重组质粒命名为pEGFP-N1-MSTN<,1>-MSTN<,2>，即为myostatin基因的RNAi双元表达载体。
试验Ⅱ利用脂质体成功地将构建好的pEGFP-N1-MSTN<,1>-MSTN<,2>转染到体外培养的成肌细胞中，观察成肌细胞的增殖与分化、细胞的融合率和测定MSTN蛋白表达量，结果细胞的增殖与分化增多、细胞的融合率增加，通过Western blot分析MSTN蛋白表达量也发现MSTN表达增多。结果证明：本试验构建的pEGFP-N1-MSTN<,1>-MSTN<,2>双元表达载体可以抑制成肌细胞中MSTN基因的表达，从而促进成肌细胞的增殖与分化。