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目的：本课题通过调查父源印记基因H19上游区域在人体血液、正常精子、少弱精子症患者精子中的甲基化状态，建立利用定量PCR对精斑及疑有精子的混和斑进行鉴定的方法，并初步讨论其在法医学、临床男性不育中的意义。方法：1.应用甲基化敏感性限制性内切酶-qPCR(MSRE-qPCR)法，对32例血液样本、32例正常精液样本及17例少弱精子症患者精液样本中H19基因上游区域甲基化水平进行分析。2.对32例血液样本、32例正常精液样H19基因上游区域甲基化水平结果进行统计学分析，并确定判定精子的判别值。3.应用MSRE-qPCR法，对混和了一定比例全血基因组DNA的精子DNA样本中H19基因上游区域甲基化状态进行分析，模拟混和斑中精子含量的鉴定。结果：精子父源印记基因H19上游区域甲基化水平明显高于血液，32例血液样本中父源印记基因H19上游区域甲基化水平为55.27±8.36%，32例精子样本中父源印记基因H19上游区域甲基化水平为101.94±11.66%，17例少弱精子症患者精液样本中父源印记基因H19上游区域甲基化水平为80.70±22.30%，以97.66-106.21%做为采用MSRE-qPCR方法分析父源印记基因H19上游区域甲基化水平进行精液斑判定的判别区间。结论：精子中父源印记基因H19上游区域具有高甲基化状态，可作为鉴定正常精子的特异性标记，同时本文确定了父源印记基因H19上游区域甲基化水平，对于健康人群，52.25%-58.28%为纯血液斑判别区间，97.66-106.21%为纯精液斑判别区间，66.63-90.28%为血液与精液混合斑判别区间。异常精子因其甲基化水平变异大，因而影响未知样品的正确判别，但若甲基化水平超过97.66%时仍可判定为纯精液斑。