中草药是我国重要的药物资源,开发价值很高,从中筛选出PPARγ活性成分具有重要意义,而传统的筛选中药有效成分的模型大多成本高,步骤复杂,我们需要构建一种新的高效,便捷,低成本的筛药模型,生物色谱近年来发展较为迅速,硅胶是一种理想的固定受体的材料,但是缺乏一定的生物相容性限制了它的应用。M1.3折纸是最近提出的小折纸,成本低,生物相容性好,可以弥补硅胶的缺点,在本文中构建了基于M1.3折纸组装PPARγ的生物色谱模型。首先,考察了宿主菌JM109、Mg2+对M13噬菌体中M13mp18ssDNA的产量的影响,优化了M13mp18ssDNA的提取工艺,提高了M13ssDNA的产量;利用两条寡核苷酸链与M13mp18ssDNA通过退火程序构建EcoRI、BglII酶切位点,利用EcoRI、BglII消化双链DNA片段得到含有704个碱基的M1.3ssDNA;将所得M1.3ssDNA作为脚手架链与经过修饰的订书钉链混合,经过退火得到带有氨基以及游离DNA链的M1.3折纸,经过琼脂糖凝胶电泳和透射电镜表征显示M1.3折纸已成功组装;以Ecoil.BL21(DE3)为表达菌株,经IPTG诱导提取纯化得到带有His标签的hPPARγ配体结合域(LBD)重组蛋白,SDS-PAGE电泳结果表示成功提取到纯度较高的hPPARγ配体结合域重组蛋白;在hPPARγ配体结合域重组蛋白表面修饰上一条与M1.3折纸游离DNA链互补的寡核苷酸链,利用碱基互补配对原则,将受体蛋白排布在M1.3折纸表面,结果表明受体蛋白成功排布在M1.3折纸表面;在生物交联剂SMCC的作用下,再将带有氨基的M1.3折纸—PPARγ受体复合物交联到巯基化硅胶的表面上,得到M1.3折纸组装PPARγ受体生物色谱固定相,经湿法装柱,完成M1.3折纸组装PPARγ受体生物色谱柱的制备。其次,对该生物色谱柱的亲和性,选择性和稳定性进行了考察。以核受体PPARγ人工合成配体罗格列酮和天然配体姜黄素作为阳性药,观察二者在阴性对照柱和M1.3折纸—PPARγ生物色谱柱的保留行为评价该生物色谱柱的亲和性;以保泰松作为阴性药,以保泰松和罗格列酮的混合溶液作为考察对象,观察二者在自制生物色谱柱上的保留行为以此评价该生物色谱柱的选择性;选择姜黄素作为工具药,通过观察姜黄素一个月内在生物色谱柱上的保留行为,以此评价该生物色谱柱的稳定性。结果显示,PPARγ配体罗格列酮和姜黄素均在M1.3折纸—PPARγ生物色谱柱上有明显保留行为,而保泰松和罗格列酮在该自制生物色谱柱上的保留行为有显著差异,初步证明该生物色谱柱对PPARγ配体具有亲和性,并且能够选择性地从混合溶液中筛选出与核受体PPARγ相互作用的成分;随着时间的推移,生物色谱柱对姜黄素的保留能力逐渐减弱,说明色谱柱稳定性逐渐降低。最后,本文利用自制生物色谱柱对人参总皂苷,栀子提取物,大黄提取物进行有效成分的筛选,发现三种中药在生物色谱柱上均有保留,用HPLC-MS分析人参总皂苷的保留组分,结果表明有效组分是人参皂苷Re;用HPLC分析栀子提取物中的保留组分,结果表明是栀子苷;大黄中的有效组分有待进一步确定。本文所构建的M1.3折纸组装PPARγ受体生物色谱模型具有高效,简便的特点,能够直接对复杂组分进行活性成分的初筛,大大节省了药物筛选的时间与成本。