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利用本实验室构建的黄喉拟水龟SMART全长cDNA文库，筛选得到巨噬细胞炎症蛋白-3α（MaMIP-3α或MaCCL20）全长cDNA序列，Maccl20基因cDNA全长2318bp，5’非编码区（Untranslated region, UTR）长1525bp，3’UTR长532bp，开放阅读框（Open reading frame, ORF）为261bp，编码86个氨基酸组成的多肽链，分子量为9.739kDa，理论等电点为9.004。综合亲水性表面可及性以及抗原指数三项指标，预测可形成抗原表位的氨基酸区域数为7。同源性分析表明，黄喉拟水龟与变色蜥（Anolis carolinensis）、原鸡（Gallus gallus）的巨噬细胞炎症蛋白-3α亲缘关系最近。荧光定量PCR结果显示：MaMIP-3α在肝脏、肾脏、心脏、脾脏中均有表达，脾脏中表达量最高。根据黄喉拟水龟巨噬细胞炎症蛋白-3α（Mauremys mutica Cantor Macrophageinflammatory protein3α，MaMIP-3α或MaCCL20）的cDNA全长设计特异性引物，然后采用PCR克隆技术从黄喉拟水龟的肝脏组织中克隆出MaMIP-3α的成熟肽的基因序列。将得到的成熟肽序列插入到PMD18-T克隆载体上，转化进大肠杆菌E.coli DH5α中，得到的质粒经PCR以及测序鉴定正确后，将双酶切目的片段插入到表达载体pET-32a上，构建成原核表达重组质粒pET-32a-CCL20并将表达质粒转化入大肠杆菌BL21中，经IPTG诱导后成功表达出了pET-32a-CCL20融合蛋白。以该融合蛋白为抗原制备了多克隆抗体。经过测序分析表明，MaCCL20的成熟太基因序列成功的插入到表达载体Pet-32a中。经过IPTG诱导表达、SDS-PAGE凝胶电泳和Western bolt分析显示，所表达的融合蛋白的相对分子质量约为30KD，与目的蛋白大小一致并且与带His标签的单克隆抗体发生特异性反应。经His Bind镍柱纯化后SDS-PAGE凝胶电泳检测出现单一条带。实验结果表明成功的获得了黄喉拟水龟MaCCL20的多克隆抗体。为建立检测黄喉拟水龟内源性MaCCL20的免疫检测法、酶联免疫吸附法、放射性免疫法等奠定了基础，为后续探索巨噬细胞炎症蛋白-3α在黄喉拟水龟的非特异性免疫反应中作用提供了一些重要的信息。