目的:本研究分析临床上血清HBsAg阴性、HBV DNA阳性的HBV隐匿性感染的血清学标志物表达模式,评价CIA法的检测性能。通过对OBI标本HBV S区基因特别是“α”决定簇内核苷酸的测序,分析HBV S区基因突变导致的氨基酸替换现象。进一步分析本地区HBV S区基因高频突变位点,及流行病学数据,探讨造成OBI的原因及其病理生理学机制。方法:本研究分为两个部分。第一部分:收集临床上HBcAb阳性、HBsAg阴性的五组血清学模式血清样本1527例,通过ELISA复筛HBcAb从中选择OD450nm值<0.070的样本,采用高敏PCR检测试剂盒检测HBV DNA。第二部分:收集第一部分研究中经HBV DNA检测阳性的OBI组样本和HBV DNA高载量的慢乙肝病人对照组样本。使用两轮PCR扩增技术扩增筛选出的OBI临床样本HBV S区基因全长,通过对PCR产物直接测序或克隆测序对HBV S区基因进行核苷酸序列分析,将得到的S区基因序列与相应基因亚型的参考序列进行比对分析,获得各样本HBV S区基因突变及氨基酸变异的情况。统计学分析:采用SPSS19.0统计软件进行数据处理与统计学分析,多组及各组率的比较均采用χ~2检验,当以P<0.05(双侧)为差异有统计学意义。(各组率两两比较中,当样本含量>40且每个格子中的理论频数≥5时,采用χ~2检验;当样本量>40但1≤理论频数<5时,需采用卡方检验的校正公式)结果:第一部分:1527例HBcAb阳性、HBsAg阴性的血清样本经ELISA复筛HBcAb其中OD450nm值<0.070 423例,423例血清样本进行高敏PCR检测,获得42例HBV DNA阳性(HBV DNA>20IU/ml为阳性),阳性率为2.75%(42/1527)。28例HBV DNA载量为20~1×10~2 IU/ml;8例为1×10~2~1×10~3 IU/ml;6例>10~3IU/ml,主要以低水平形式存在。以HBeAb和HBcAb阳性,以及HBsAb、HBeAb和HBcAb阳性这两种血清学模式中HBV DNA检出率相对较高。HBcAb S/Co≥10.0样本HBV DNA阳性率显著高于其他血清学模式组,可达5.26%(4/76)。第二部分:OBI组42例样本中仅有20例成功扩增出明亮的目的基因条带,共计进行了100个克隆菌株进行测序分析,每一例样本5个克隆,68个克隆菌株质粒经测序证实为HBV S区基因。慢乙肝对照组10例样本全部扩增出明亮的目的基因条带,PCR纯化产物测序均为HBV S区基因。OBI组MHR区域内共有16个位点发生62次突变,突变率3.80%(62/1632),其中“α”决定簇内常见的突变位点有:I126T、C124R、M133L;MHR区域内常见的突变位点有(除去“α”决定簇):K122E、L162R、V106G。慢乙肝对照组MHR区域内共计发生5次突变,其中“α”决定簇内4次。OBI组在MHR区域内的突变率要显著高于慢乙肝对照组(P<0.05)。本研究发现的I126T、K122E、L162R等HBV C型主要突变类型,在文献中鲜有报道。结论:CIA法作为业界HBsAg检测敏感性和特异性均很高的方法,依然存在HBsAg漏检的现象。临床上对于HBsAg阴性伴高反应性HBcAb(S/Co值≥10.0)的患者应进一步行HBV DNA检测,以明确OBI的存在。各采供血中心应扩大NAT技术的使用,可适当增加HBcAb项目为献血筛查项目,谨防OBI献血员的血液制品流向临床造成血源性HBV感染。针对我国地区热点突变位点研发新型的血清学诊断试剂,增强HBsAg检测试剂的敏感性及特异性,提高识别变异HBsAg的能力。