目的:探讨神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)在体外培养神经元建立氧糖剥夺模型中的水平变化。方法:通过体外原代培养24h内的新生SD大鼠大脑海马神经元,应用免疫荧光染色及电子显微镜鉴定神经元细胞,应用体外氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)建立大鼠神经元细胞缺血缺氧损伤模型,分别对复氧1h、6h、12h、24h、48h、72h的神经元提取蛋白质,并通过Western-Blot法检测上述不同时间点神经元损伤模型中NSE水平。结果:1.4-6h神经元细胞基本贴壁,随着时间增加,神经元形态发生变化,突起增长、变粗,胞体增大、饱满,突起纵横交错,形成神经网络。2.通过免疫荧光染色证明所培养的是神经元细胞,细胞核染色清晰,形态典型,突起走形如网状。3.NSE水平在神经元细胞损伤后6h开始升高,24-48h达到高峰,72h表达逐渐减少(P<0.01)。结论:1.通过本方法原代培养新生大鼠海马神经元细胞,获得的神经元细胞纯度高,方法简单易行,可作为神经元体外培养的良好模型用于以后的研究。2.氧-糖剥夺可造成神经元的损伤,不同时间点细胞中神经元特异性烯醇化酶(NSE)呈现一定的时相性变化。