秦巴硒菇提取物(FA-2-b-β)对慢性髓系白血病的实验研究

来源 :甘肃中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qilina15832583026
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研究目的:本研究选取秦巴硒菇提取物酸性RNA蛋白复合物FA-2-b-β作用于慢性髓系白血病K562细胞株、慢性髓系原代白血病细胞,通过Wnt/β-catenin、Caspase信号通路研究其对慢性髓系白血病凋亡的影响机制,为秦巴硒菇的临床应用提供实验依据。研究方法:CCK8法检测慢性髓系白血病K562细胞、原代细胞增殖抑制率,不同浓度的FA-2-b-β(0、1.2、1.5、1.8、2.1、2.4mg/mL)作用于K562细胞、原代细胞24、48h、72h,计算细胞增殖抑制率;Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测慢性髓系白血病K562细胞、原代细胞凋亡率、周期;RT-qPCR及Western-blot法检测Wnt/β-catenin信号通路中相关凋亡基因BCL-2、BAX、β-catenin的表达,凋亡蛋白β-catenin、BCL-2、BAX、CD44、CyclinD1、LEF/TCF-4、C-Jun、MMP的表达;建立慢性髓系白血病模型小鼠,观察模型小鼠体重、血细胞计数、生存曲线,HE染色、免疫荧光、免疫组化、RT-qPCR及Western-blot法检测Caspase信号通路中相关凋亡蛋白、基因Bcl-2、CytochromeC、Caspase8、Caspase9的表达。研究结果:体外实验研究结果显示与空白对照组相比,CCK8法检测结果发现,不同浓度的FA-2-b-β作用于K562细胞、原代细胞24、48、72h后,细胞增殖抑制率增加,且呈浓度时间依赖性,其r值为:rK562-24h=-0.9111、rK562-48h=-0.9067、rK562-72h=-0.9213、r原-24h=-9082、r原-48h=-9442、r原-72h=-9546;流式细胞术检测结果发现不同浓度的FA-2-b-β(1.2,1.8 and 2.4 mg/mL)作用于K562细胞、原代细胞24、48h后,K562细胞的调亡率依次为1.18/0.11%、9.91/25.21%、79.49/71.83%、93.4/95.74%;原代细胞凋亡率依次为3.94/10.7%、17.8/30.4%、49.21/52.89%、81.13/79.81%;不同浓度FA-2-b-β(1.2,1.8 and 2.4 mg/mL)作用于K562细胞、原代细胞24、48h后,K562细胞周期变化为加药组G1百分比随着药物浓度的增加而上升,依次为33.73%/37.18%、34.94%/37.01%、37.36%/43.09%和41.53%/60.64%,原代细胞GI期百分比依次为33.73%/37.65%、37.01%/45.07%、56.95%/53.11%和58.99%/60.66%;S期细胞百分比随着药物浓度的增加而降低K562细胞S期百分比依次为46/46%、54/49%、58/27%和46/46%,原代细胞S期百分比依次为:46/46%、49/40%、27/29%和26/31%;RT-qPCR法检测结果发现抑制凋亡基因β-catenin,BCL-2以剂量依赖性方式降低,促凋亡基因BAX以剂量依赖性方式增加;Western-blot法检测结果示抑制凋亡蛋白β-catenin、BCL-2、CD44、CyclinD1、Lef/Tcf-4、CJun、mmp以剂量依赖性方式降低,促凋亡蛋白BAX以剂量依赖性方式增加。体内实验结果检测发现实验组(FA-2-b-β)和阳性对照组(IM)组相比,具有相似的治疗效果,均可延长模型小鼠生存期,并升高血细胞数,体重恢复至正常,尽管白细胞数治疗后仍高;促凋亡基因、蛋白Bax、Caspase-3表达上调,抑制凋亡基因、蛋白Bcl-2、CytochromeC、Caspase8、Caspase9表达下降。结论:秦巴硒菇提取物酸性RNA蛋白复合物FA-2-b-β可以抑制慢性髓系白血病细胞增殖且呈浓度时间依赖性,诱导K562细胞、原代细胞凋亡,将细胞周期阻滞在G1期DNA合成期,其机制可能与Wnt/β-catenin、Caspase信号通路有关。
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