格瑞菲斯瓦尔德磁螺菌(Magnetospirillum gryphiswaldense)MSR-1磁小体合成相关基因的克隆及其功能分析

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趋磁细菌是一类能够沿着磁场方向运动的革兰氏阴性细菌的总称,其最显著的特征是能够在胞内磁小体。磁小体是具有外膜包被、纳米级、在胞内成链状排列的Fe3O4或Fe3S4磁性颗粒,并且具有专属的形态、大小和排列。磁小体的合成是一个涉及众多基因和蛋白共同参与的复杂过程。现阶段,其合成机制尚不完全清楚,为了进一步揭示该过程,本文利用格瑞菲斯瓦尔德磁螺菌(Magnetospirillum gryphiswaldense)MSR-1为出发菌株,寻找磁小体合成的基因,并探讨相关基因的功能。通过Tn5转座插入突变的方法构建磁小体缺失突变株,克隆突变株的Tn5侧翼序列。克隆出一段4642bp的由2个ORF组成的DNA片段。其中Tn5插入在2173bp和2174bp之间,插在ORF2内部。对ORF2的同源性分析发现:ORF2编码的蛋白(643AA)与Magnetospirillum magneticum AMB-1的长为644AA的主要易化超家族(MFS)通透酶的同源性为593/644(92%),与marine magnetic coccus strains MC-1的长为642AA的铁离子还原酶的同源性为303/624(49%)。使用生物学软件对ORF2编码的蛋白进行分析:该蛋白有17个跨膜结构,没有信号肽,有19磷酸化位点,二级结构有20个α螺旋和2个β折叠。推测,ORF2编码的蛋白可能是一个跨膜蛋白,参与向胞内转运并还原Fe3+的过程。
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