抗Nisin乳酸菌筛选及其生物学特性研究

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应用纯接种乳酸发酵技术生产发酵蔬菜是对传统自然发酵模式的一种变革,也是发酵技术现代化的一种标志。 本论文旨在筛选可用于蔬菜发酵的优良菌株,为低盐化发酵蔬菜的开发做一些基础性的研究工作。考虑到食盐在蔬菜发酵中不仅起到增进制品风味的作用,更主要的是在发酵中能够抑制杂菌的生长,所以在降低用盐量的同时需要解决杂菌抑制的问题。本研究意欲利用天然的食品防腐剂Nisin来协同食盐达到抑菌的目的。Nisin是由各种乳酸乳球菌(Lactoccus lactis subsp. lactis)产生的具有抑菌(杀菌)活性的多肽类化合物,早已进行商业化生产,因而较易获得,现已被许多国家和地区批准作为食品防腐剂用于食品生产中。但是Nisin不仅能够抑制许多革兰氏阳性食品腐败菌的生长,而且能够抑制包括明串珠菌、乳杆菌在内的多数乳酸菌的生长繁殖,因此要求所选育的优良发酵剂能够耐受一定浓度的Nisin,以便加入的Nisin既能抑制杂菌的生长,又不影响发酵的顺利完成。主要的研究结果如下: 1.经过分离筛选,从362株菌中得到两株能够耐受2000IU/ml乳链菌肽的高抗菌株,利用现代分析技术与经典分类法对其中一株菌Ls-5105进行系统细菌学鉴定,鉴定该菌株为明串珠菌属肠膜明串珠菌肠膜亚种(Leuconostoc mesenteroides subsp. mesenteroides),另一株菌Lb-31010来源于实验室保藏的植物乳杆菌。 2.对Ls-5105、Lb-31010两菌株在含有2000IU/ml Nisin MRS培养液及不合Nisin MRS培养液中的生长、菌体繁殖(OD值)、产酸能力及发酵液pH值的变化情况进行了测定、比较,发现Nisin对菌株的生长有一定的延滞作用,但最终的变化趋势一致。另外,测定了Ls-5105及Lb-31010在不同pH值、盐浓度、温度下的生长特性,结果表明,Ls-5105生长的最适温度为25-30℃,最适pH值为6.0-7.0,能够耐受5%以下的盐浓度,3%以下的盐浓度下生长较好;Lb-31010生长的最适温度为35-37℃,最适初始pH值为5.0-7.0,能够耐受8%以下的盐浓度,3%以下的盐浓度对其生长影响不明显。 3.发酵后的残余Nisin效价试验,菌株抑菌活性代谢产物的检测,及质粒消除试验结果表明,抗Nisin菌株不分解Nisin,不产生抑菌物质,吖啶橙处理后菌株Nisin抗性无显著变化。 4.利用正交试验法确定了添加Nisin并接种耐Nisin菌株Ls-5105及Lb-31010进行蔬菜发酵的最优工艺参数:接种量5%,接种比例1:1,Nisin加入量150mg/kg, 抗Nisin乳酸菌筛选及其生物学特性研究食盐 2见 白砂糖 3地 培养温度 3 0 C,发酵时间 5 k。另外还研究了最优发酵树下发酵赔中细菌总数、乳酸菌、亚硝酸盐、PH值、滴定鹏等的变化情况以及发酵前后部分风味成分的变化.
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