猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)病和猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)病是目前危害世界养猪业的重大疫病,其中PPV和PCV2混合感染广泛存在于猪群中,二者混合感染后PPV能够明显促进PCV2相关疾病的发生,加重临床发病的严重程度。目前,对于这两种疾病的防治主要是分别免疫PPV和PCV2油佐剂单苗,这样不仅存在生物安全和副反应问题,而且还有多次免疫引起的应激反应和细胞免疫应答水平差的缺点。因此,研制更加安全、高效,一针防两病的二联亚单位疫苗具有重要意义。本研究在通过对PPV和PCV2相关基因的功能和特性进行分析的基础上,设计截去影响Cap蛋白表达的NLS信号肽序列,获得截短的Cap蛋白基因序列以及完整的VP2蛋白基因序列,利用大肠杆菌表达系统成功表达出两种蛋白,纯化后获得浓度为1213μg/mL的Cap蛋白和1025μg/mL的VP2蛋白,经过SDS-PAGE和Western-blotting法证明两种蛋白均具有良好的免疫原性。此外,本研究还选择了能够诱导机体产生细胞免疫反应的Montanide ISA201佐剂制备VP2蛋白和Cap蛋白单苗及其二联亚单位疫苗。成功建立了小鼠攻毒保护模型,并进行了豚鼠和仔猪的免疫试验,验证了自制的二联亚单位疫苗能够诱导机体产生良好的体液和细胞免疫反应,两种蛋白混合乳化后无相互免疫抑制作用,且免疫效果与单苗相当。本研究利用大肠杆菌表达系统能够较好地表达PPV VP2蛋白和PCV2 Cap蛋白,并且用这两种蛋白制备的Montanide ISA201佐剂双水相疫苗能够弥补现前油佐剂单苗的缺陷,诱导机体产生良好的细胞免疫反应和体液免疫反应,为后期二联亚单位疫苗的研发奠定基础。