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鸭病毒性肠炎（duck viral enteritis，DVE），又名鸭瘟（duck plague，DP），是鸭、鹅及多种雁形目禽类的一种急性、热性、败血性传染病，曾相继在多个国家和地区流行，给养鸭业造成巨大的经济损失。本病病原为鸭肠炎病毒（Duck enteritis virus，DEV），亦称鸭疱疹病毒1型（Anatid herpesvirus1），在2011年第九次病毒分类报告（ICTV）中，将其划分为疱疹病毒科甲型疱疹病毒亚科马立克病毒属。根据本实验室克隆DEV C-KCE株US区序列和TK序列设计引物，扩增同源臂基因，将左右同源臂基因克隆至pEASY-blunt simple和pMD18-T simple载体，构建pEASY-S3和pMD18T-TK载体。将表达盒插入pEASY-S3、pMD18-T-TK两同源臂构建缺失病毒转移载体pEASY-S3-gpt-EGFP、pMD18-T-TK-gpt。将重组载体与DEV感染细胞的总DNA共转染次代鸭胚成纤维细胞（DEF），利用霉酚酸（MPA）加压，8代筛选、富集和纯化，得到重组病毒，经PCR、IIF鉴定正确，命名为DEV-ΔS3、DEV-ΔTK。分别提取鸡胚成纤维（CEF）细胞和DEF细胞上不同代重组病毒DEV-ΔS3、DEV-ΔTK基因组分别扩增鉴定基因皆得到阳性结果，证明缺失重组病毒稳定存在。将100TCID50DEV和DEV-ΔS3以及DEV-ΔTK分别接种于CEF细胞，在不同时间分别收集接毒后细胞上清、接毒后细胞和上清以及接毒后用胰酶消化的细胞，测定病毒效价，绘制病毒生长曲线，结果表明SORF3基因和TK基因可能与DEV病毒的侵入有关。亲本病毒与重组病毒的蚀斑大小无显著差异，表明SORF3和TK基因的缺失并没有影响病毒的毒力。测定亲本病毒与重组病毒效价，以5000TCID50/只将重组病毒及亲本病毒免疫4周龄SPF鸭，每组隔离培养，设立同居组、亲本病毒组及疫苗组对照。每周采集鸭血收集血清，利用间接ELISA方法检测血清中抗体IgG的变化规律。结果显示，重组病毒和亲本病毒免疫组比疫苗免疫组产生抗体的时间稍晚，但抗体持续时间比疫苗免疫组要长，重组病毒免疫组的抗体水平略低于亲本病毒免疫，差异不显著，同居组的抗体水平略有上升仍为阴性；同时也对各组免疫鸭的咽及泄殖腔棉拭子进行了DEV的基因检测，没有扩出相应的目的片段，说明重组病毒和亲本病毒免疫并不能引起免疫鸭的排毒。中和抗体试验的结果显示重组病毒组与亲本病毒具有相似的免疫原性。免疫后第九周分别取亲本病毒组，重组病毒组及商品化疫苗组试验鸭的心脏、肝脏及脾脏做病理切片，显微镜观察各组之间各脏器并未因免疫而出现病理损伤，推断重组病毒作为疫苗是安全的。综上，SORF3基因及TK基因对病毒的复制没有明显的影响，SORF3及TK基因为DEV的复制非必需基因，为DEV疫苗的构建提供了优势候选位点，DEV-ΔS3、DEV-ΔTK免疫鸭刺激机体产生血清抗体和中和抗体水平与亲本病毒及商品化疫苗无显著差异。