三七对兔颈椎间盘细胞凋亡的影响

来源 :广西中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lazysands
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目的:本课题通过观察中药三七对家兔颈椎间盘细胞凋亡的影响,为临床上应用中药三七防治颈椎病提供理论基础。  方法:随机将24只新西兰大白兔分为A、B、C组,每组8只,A为造模给药组,B组为造模对照组(A、B两组均颈椎间盘退变模型),C组为正常假手术组,造模方法如下:将兔颈后部剃毛,以化学纯氨基酸乙酯(乌拉坦)麻醉,用0.9%盐水将其配成25%的溶液,按1g/kg(4ml/kg)耳缘静脉注射,麻醉后,新洁尔灭酊消毒,无菌操作。术前10分钟给青霉素(20万u/kg)肌注一次,造模后切口涂敷少许红霉素软膏预防术后感染.A、B两组均为颈椎间盘退变模型,按照静力失衡性颈椎病动物模型的造模方法,俯卧位固定,取颈后部正中纵向切口(从环枕关节至第二胸椎棘突处)长约7cm切开皮肤后,钝性分离直至充分暴露棘突。将脊柱两侧附着于棘突椎板及小关节的肌肉全部分离,然后依次切除C2~C7棘上及棘间韧带,术后依序缝合皮下筋膜及皮肤。C组为正常假手术组,在颈后部正中皮肤上作一长约7cm的切口,止血后缝合。  3组动物均于5天后拆线,A组给中药三七,通过将药物均匀混入饲料中给药,剂量均按体重换算﹙20mg/kg·d﹚;B组不给药,为模型空白对照组;C组不给药,为正常对照组。3组动物在同样环境中自由饮水、摄食。手术造模六月后,将大白兔全部处死,取颈6-7椎间盘及相邻部分椎体,观察椎间盘形态学及免疫组化染色观察椎间盘细胞凋亡指数。  结果:1、HE染色结果(图1~3),A组(造模给药组):较模型组明显好转,纤维环胶原排列稍松散,轻度粘液变;髓核软骨细胞数量较模型组明显增多,排列稍乱,变性细胞少。B组(造模对照组):纤维环胶原排列松散,粘液变明显,髓核软骨细胞数量明显减少,排列紊乱,细胞分布疏密不均,并出现变性细胞。C组(正常假手术组):椎间盘由外周规则排列的纤维环和髓核构成,髓核细胞量多,排列规整,分布均匀;细胞形态良好。  2、TUNEL免疫荧光染色的结果显示(图4~6),C组(正常假手术组)的椎间盘组织虽有阳性染色细胞出现,但数量较少,40倍光镜下计数20个视野,平均每个视野的阳性细胞数仅为3个。B组(造模对照组)椎间盘组织内则有大量TUNEL阳性染色细胞出现,40倍光镜下计数20个视野,平均每个视野的阳性细胞数为11个。A组(造模给药组)椎间盘组织内TUNEL阳性染色细胞出现较模型空白对照组明显减少40倍光镜下计数20个视野,平均每个视野的阳性细胞数为4个。Vidas图像分析系统进行免疫阳性细胞半定量分析,结果测得正常组,实验对照组和实验组平均光密度(OPTDM)值分别为0.00168士0.00100,0.15862士0.03988和0.00261士0.00125,正常假手术组及造模给药组两者之间比较在统计学上无差别(F=11.69,q=3.190,P>0.05),而造模对照组则与两者之间均有显著性差异(q=3.923,P<0.05)。  结论:C组椎间盘细胞凋亡指数低于其余各组,与B组比较差异有显著意义(P<0.05);A组与B、C组比较,尽管细胞凋亡指数偏高,但与C组比较差异没有显著意义(P>0.05),与B组比较差异有显著意义(P<0.05)。说明动物颈椎间盘退变与椎间盘细胞凋亡有关。在本实验中A组(造模给药组)细胞凋亡指数明显低于B组,药物对椎间盘细胞凋亡的影响差异有显著意义,显示中药三七有可抑制椎间盘细胞凋亡的作用。
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