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一、PTEN基因多态性与肝细胞肝癌遗传易感性的相关性研究目的:PTEN是一个抑癌基因,它控制许多生物学进程,包括细胞的增殖、迁移和死亡。本课题诣在探讨PTEN基因的遗传多态性对肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma, HCC)患病风险的影响。方法:通过文献报道和生物软件的预测,我们筛选出PTEN基因的四个多态性位点,它们分别为rs34421660、rs10490920、rs532678和rs701848。接着我们采用病例-对照的研究方法,在中国汉族人群的134例肝细胞肝癌患者和215例年龄、性别与之相匹配的正常对照中,对PTEN基因上的这四个多态性位点进行基因分型。其中多态性位点rs34421660利用PCR的方法直接进行基因分型,另外三个单核苷酸多态性位点利用限制性酶切片段多肽性(PCR-RFLP)方法对其进行基因分型。利用SHEsis生物学软件和SPSS13.0统计软件对数据资料进行分析,验证PTEN基因的多肽性是否与肝细胞肝癌的发生有关。结果:PTEN基因的四个多肽性位点的等位基因和基因型频率在病例组和正常对照组之间都没有统计学的差异,接着根据它们的基因型数据和连锁不平衡性构建了PTEN基因单倍型,统计分析发现单倍型T-C-C-del和T-T-T-ins与肝细胞肝癌的发生有一定的相关性。结论:PTEN基因的单个核酸多态性与肝细胞肝癌易感性无关,但是它们组成的单倍型可能与中国汉族人群的肝细胞肝癌的发生有一定的关联性。二、PTEN基因剪接变异体与肝细胞肝癌发生的相关研究目的:研究PTEN基因在肝细胞肝癌组织中是否存在新的剪接变异体,探讨PTEN基因在肝细胞肝癌发生发展中的作用。方法:提取61例肝细胞肝癌组织中的总RNA,逆转成cDNA。根据Genbank上的PTEN基因cDNA序列,设计六对不同的引物并以肝细胞肝癌组织cDNA为模板分别扩增外显子1-2、1-3、2-4、3-5、4-6和5-7之间的片段,得到的PCR产物进行3%琼脂糖凝胶电泳,比较不同样本扩增出来的目的条带异同。结果:每对引物分别做了61例肝细胞肝癌患者组织,3%琼脂糖凝胶电泳后发现每对引物扩增出来的目的条带大小相同,与野生型剪接体一致。结论:PTEN基因在肝细胞肝癌中不存在新的剪接变异体,说明在肝细胞肝癌发生发展中PTEN可能没有出现异常的mRNA可变剪接。