丝素/羟基磷灰石复合骨修复材料研究

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丝素蛋白因其具有良好的生物相容性,优异的力学性能以及可生物降解性得到生物医用材料研究人员越来越多的关注。其可控的溶解再生后塑形性能使得诸如丝素多孔膜,凝胶,微球以及三维医用修复支架材料等易于实现。支架由于具有三维立体结构,以及相互连通的多孔结构为营养物质和代谢废物的运输提供通道,能够支持细胞粘附、增殖和相关组织再生,同时兼备一定的力学和生物降解性能使其作为组织工程支架成为可能。再生丝素蛋白溶液可通过冷冻干燥法制备多孔支架材料,但其成孔性能较差,一般为片层,且性脆而力学性能欠缺。利用盐析法制备的丝素多孔支架材料为多孔形貌,而且有着可控的孔隙率及孔径。传统的有机溶剂来源的丝素多孔支架通常是通过六氟异丙醇溶解再生丝素材料,一般丝素浓度可达到17%。然而,制备过程繁琐且水处理去盐(NaCI)前需要经过有机溶剂(一般为甲醇或乙醇)处理来诱导支架二级结构从无规卷曲向水不溶的silk Ⅱ转变。本文采用新型的酸/盐(甲酸/氯化钙)溶解体系可直接溶解脱胶后的丝素纤维,通过盐析法制备丝素支架材料。已有文献表明酸/盐溶解制备的丝素材料可通过水处理来除盐和诱导其结构从无规卷曲向silkⅡ转变,为了深入解析有机溶剂后处理对酸/盐溶解丝素材料结构与性能影响,我们在水处理前分别进行乙醇、甲醇水不溶处理。研究结果表明,水处理、乙醇处理和甲醇处理均能诱导再生丝素支架二级结构从无规卷曲向silkⅡ转变。虽然三种不同后处理方式支架微观结构均是纳米纤维状,然而相比较于甲醇处理的丝素支架,水处理和乙醇处理的丝素支架有着更规整的外观形貌。将SD大鼠嗅鞘细胞(OECs)在支架上进行细胞培养,研究不同后处理方式丝素多孔支架细胞生物相容性,结果表明,水处理的丝素多孔支架有着更好的生物相容性。在此基础上,研究不同致孔剂含量及丝素浓度对支架性能影响。研究结果表明,改变致孔剂含量及丝素浓度对支架二级结构、热学性能影响不大。然而,增加致孔剂含量,支架力学性能出现先增加后降低的趋势,当致孔剂含量为3g/ml时,支架的力学性能最高。支架力学性能随着丝素浓度增加出现先增加后降低趋势,当丝素浓度为30%时,支架力学性能最高。支架孔隙率随着致孔剂含量增加而增加;相反,随着丝素浓度的增加,孔隙率呈现下降的趋势。丝素支架作为组织工程用骨修复材料,其骨诱导性能不足,需要通过添加骨诱导因子来提高其成骨性。羟基磷灰石(HAP)是人骨的主要成分之一,其化学式为Ca10(P04)6(OH)2。HAP具有良好的生物相容性及骨诱导性,然而韧性不好,将HAP与丝素复合可解决这一问题。虽然HAP在丝素水溶液中分散性不好,但是已有文献表明HAP可溶于甲酸,本文进一步将HAP加入酸/盐溶解后的丝素混合溶液中。研究结果表明,当HAP含量增加到50%时,其仍能均匀分散在丝素/甲酸/氯化钙混合溶液中。丝素/羟基磷灰石复合多孔支架材料的SEM形态照片表明,当HAP含量低于33%时,HAP可均匀分散在支架中,当含量高于33%时会发生团聚现象。当HAP含量低于33%时,随着HAP含量增加,其力学性能不断提高,当HAP含量高于33%时,随着HAP含量增加,力学性能不断降低。细胞培养结果表明,改变HAP含量不改变复合支架细胞生物相容性。本文采用新型的酸/盐(甲酸/氯化钙)溶解体系溶解脱胶后的丝素纤维,在盐析法的基础上通过水处理制备丝素多孔支架材料。利用HAP可溶于甲酸的特点制备出具有骨诱导能力的丝素/羟基磷灰石复合多孔骨修复支架材料,在经细胞生物相容性表征,该材料在骨修复支架材料方面具有进一步研究前景。
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