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目的:1.构建U87EGFRvⅢ与wt U87混合培养模型,在不同比例的模型中验证EGFRvⅢ的促生长作用及其详细分子机制;进一步在体内实验和体外实验中验证EGFRvⅢ对胶质瘤异质性的驱动作用,为胶质瘤的靶向治疗提供新的途径。2.通过F25P preproinsulin与信号肽酶Spase的特异性结合,从而干扰U87EGFRvⅢ细胞中内质网上外分泌蛋白的合成与装配过程,抑制U87EGFRvⅢ细胞对周围细胞的生长支持作用,为靶向治疗EGFRvⅢ阳性胶质瘤提供新思路。3.通过干扰内质网上信号肽肽酶SPP及分析其外分泌表达谱,阐明SPP在胶质瘤进展中的分子机制。方法:1.通过临床标本的不同位点取材,免疫组织化学方法检测不同位点EGFRvⅢ,EGFR,Ki-67,STAT3,NF-KB,EZH2,PKM2的表达水平变化。2.用U87EGFRvⅢ与wt U87混合培养,MTT及细胞克隆形成实验方法检测不同混合比例水平的增殖变化;Western blot方法检测STAT3,NF-KB,EZH2,PKM2的表达水平变化。3.构建胶质瘤颅内原位模型,研究不同比例EGFRvⅢ的促肿瘤生长效果。4.利用含F25P preproinsulin的慢病毒处理U87EGFRvⅢ,分析其上清液对胶质瘤细胞U87,LN229和U251的表型及功能的影响。5.构建胶质瘤颅内原位动物模型,使用DOX诱导,检测F25P preproinsulin的体内抑瘤效果。6.用表达si-HM13的慢病毒处理U87EGFRvⅢ细胞,分析其上清液中外分泌蛋白的表达谱及其对U87,LN229和U251细胞表型及功能的影响.7.构建胶质瘤颅内原位动物模型,检测si-HM13的体内抑瘤效果。结果:1.胶质瘤同一标本中不同位点EGFRvⅢ,EGFR,Ki-67,STAT3,NF-KB,EZH2,PKM2的表达存在显著异质性。2.不同比例U87EGFRvⅢ与wt U87混合培养细胞的增殖速率明显不同,U87EGFRvⅢ比例为30%时增殖速率达到平台期。3.体内实验证实EGFRvⅢ对胶质瘤的生长有驱动作用。4.含F25P preproinsulin慢病毒处理的U87EGFRvⅢ的上清液对U87,LN229和U251的表型及功能改变有明显的影响。5.胶质瘤颅内模型证实诱导表达F25P preproinsulin能抑制胶质瘤的生长。6.si-HM13慢病毒处理的U87EGFRvⅢ细胞的外分泌表达谱变化明显,其中TGF-β1变化最为显著。7.体内实验证实Lenti-si-HM13能显著降低小鼠血液中TGF-β1和TGF-α的含量及抑制肿瘤的生长。结论:1.胶质瘤内存在明显的异质性,EGFRvⅢ对胶质瘤的生长有驱动作用。2.F25P preproinsulin能特异性结合信号肽酶Spase,影响EGFRvⅢ的外分泌蛋白合成。3.体内外研究显示诱导表达F25P preproinsulin能抑制胶质瘤的生长和转移。4.Lenti-si-HM13能影响胶质瘤EGFRvⅢ细胞外分泌蛋白在内置网上的合成与装配,进而引起其表达谱的改变。5.敲低HM13的表达能在小鼠体内抑制胶质瘤的进展。