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质谱方法以其高效、高选择性及高灵敏度的优点在分析化学领域一直发挥着不可替代的作用。基质辅助激光解吸离子化质谱(MALDI-MS)因为不需要经过复杂的前处理即可直接进样,在复杂样品的检测方面具有独特的优势。本论文的研究致力于建立MALDI-TOFMS酶催化反应及其抑制作用检测方法,包括酶活性检测和酶抑制剂筛查。另外,还研究了MALDI-SPIRAL-TOFMS衍生化方法用于α-酮酸检测。 本论文主要包括以下几方面工作: 1.MALDI-TOFMS同位素底物双通道酶抑制测量法(DEIM)的开发: 为了提高MALDI-TOFMS定量可靠性,本工作合成了新的乙酰胆碱酯酶同位素底物,实验组加入抑制剂和轻质底物,对照组加入水和重质底物,反应结束后混合,点到一个靶点上。根据谱图的峰强度可直观看出抑制剂对乙酰胆碱酯酶的抑制效应,同时可以计算抑制率,而且这种方法能得到更高的精密度,RSD在3%以内。经过验证,乙酰胆碱酯酶对同位素底物没有同位素效应。将该方法进一步用于实际样本中抑制剂的筛查,并发现25份植物粗提物中有一半能抑制AChE的活性。实验证明,所建立的MALDI-TOFMS同位素底物双通道酶抑制测量法(DEIM)精密度高,实用性强,无需进行复杂的样本前处理,有望发展为未来的药物高通量筛选平台,并将推动新药筛选的发展。 2.人造血浆环境有机磷农药酶法筛查: 农残危害巨大,常用GC,LC进行直接检测。对于未知的新型农药,酶法筛查具有独特优势。本研究尝试采用人造血浆替代普通缓冲液,从而模拟酶在体内的环境,使得乙酰胆碱酯酶的存在环境更接近人体体内的真实环境,以期充分发挥酶的催化效率,提高酶对抑制剂的敏感度,进而提高检测灵敏度。 3.α-酮酸检测的质谱衍生化方法开发: α-酮酸是一种重要的代谢中间体,它的代谢失调会导致很多疾病。因为对其检测方法有限,亟待开发新的分析方法。衍生化具有提高目标化合物灵敏度的优势,因此本工作尝试使用衍生化方法开发α-酮酸的MALDI-SPIRAL-TOFMS质谱检测方法,包括对不同的衍生化试剂,溶剂(以及是否加溶剂),缩合剂,碱,物料摩尔比和投料步骤的考察。