论文部分内容阅读
超甜玉米又称水果或蔬菜玉米,已经成为当今世界重要的一类栽培作物。然而,由于玉米螟危害造成产量损失和品质下降日趋严重。超甜玉米抗虫种质资源相对贫乏,本身缺少有效的抗虫基因资源,通过常规育种方法在短期内难以获得抗性品种。近年来,国内外应用植物转基因技术开辟了植物遗传改良的新途径。本研究在建立高效稳定基因转化受体系统的基础上,利用基因枪和子房注射两种方法将多个抗虫基因成功转化抗性较差的超甜玉米自交系及其品种,并从分子水平和目标性状上研究外源基因的转入、整合和表达。本研究得出的主要结果如下:1研究了影响超甜玉米愈伤组织诱导和胚性形成的几个关键因素,建立了超甜玉米基因转化的愈伤组织受体系统。在取材上,自交系1132和粤甜3号以胚大小在1.0-2.0mm为宜。在诱导愈伤组织上,两种基因型都是高诱导力的材料,而自交系1132能够诱导出高质量的Ⅱ型胚性愈伤,是理想的基因转化材料。两种基因型在2,4-D浓度为2mg/L时,出愈率和胚性愈伤率达到最高,胚性愈伤率分别达到45.88%和35.00%;在培养基中添加9mg/L的AgNO3极显著地提高了胚性愈伤率,比对照提高了31.25%,AgNO3在愈伤组织的诱导及改善愈伤组织的质量方面有着显著的作用。而通过添加700mg/L的脯氨酸,胚性愈伤率显著地提高了12.41%,脯氨酸具有调节渗透压和促进愈伤胚性化的作用。Basta筛选转化体适宜浓度为5mg/L。2通过优化再生和生根壮苗、移栽等条件提高分化再生频率,减少无性变异,建立了稳定、高效的超甜玉米转化后再生成株系统。研究表明,随着继代时间的延长,再生率降低直至很难再生成苗,长期继代不利于再生。蔗糖、甘露醇、ABA浓度分别为40g/L、20g/L、5.0mg/L时胚性保持率达100%。通过蔗糖和激素配比,筛选到了一个高效、稳定的再生培养基,即蔗糖、6-BA、NAA分别为20g/L、2.0mg/L、0.1mg/L时,愈伤组织分化和再生率最高,分别为81.13%和35.85%。低浓度的NAA可使再生苗的生根率达到57.72%,随着NAA和IBA浓度的增加,生根率提高到98.66%。通过激素的调节得到一个