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细菌活的不可培养状态(Viable But Nonculturable,VBNC)是指细菌不能够在常规培养基上生长但却是活的一种生理状态。进入VBNC状态的细菌绝大部分会缩小变成球形,维持低水平的新陈代谢,能够进行基因表达,能够合成蛋白质。有些进入VBNC状态的致病菌会保留有致病性或能够表达毒素基因,而且在适宜的条件下还能够复苏到正常生存状态。某些传染病的暴发流行被报道由细菌的VBNC状态引起,所以研究致病菌在饮用水中的生存状态很有必要。 瓶装水极大地方便了人们日益快节奏的生活,很受消费者的青睐。预测2013年,全球瓶装水市场交易额总值将达1064亿美元。瓶装水已经成为生活中随时随地可以接触的水源,从而也不可避免的成为了疾病传播的一大途径。市场中瓶装水根据水质不同可分为三大类:纯净水、矿物质水和矿泉水。 痢疾志贺氏菌是志贺氏菌属的一个种,在本属中引起的腹泻最为严重,它不仅能够产生内毒素形成溃疡和扰乱肠功能,而且能够产生外毒素作用于中枢神经系统。 本论文中选用痢疾志贺氏菌为研究对象,人为将其接入到已除菌的瓶装纯净水、瓶装矿物质水和瓶装矿泉水中,研究其在这三类瓶装水中能否完全进入VBNC状态。试验中,采用AODC法测定细菌总数,DVC法测定活菌数,涂布平板法测定可培养菌数,并测定水样的AOC、TOC和pH。当可培养菌数降为0,活菌数不为0时,细菌完全进入VBNC状态。同时,考察分析温度、光照和灭菌方式这三种因素对痢疾志贺氏菌进入VBNC状态的诱导影响。 实验结果显示,痢疾志贺氏菌在这三类瓶装水中、多种诱导条件下均能够完全进入VBNC状态。当细菌完全进入VBNC状态时,总菌数维持在107 cfu/ml水平,与接入量相同,个别为106~107 cfu/ml之间,稍低于接入量。活菌数为106cfu/ml或在105~106 cfu/ml之间,可见,可培养菌数为0时活菌浓度仍然很高。所以,痢疾志贺氏菌能够在瓶装水中以VBNC状态逃过检测,对饮用人的生命健康造成威胁。 光照对痢疾志贺氏菌进入VBNC状态的诱导强度在所考察的因素里排首位,能够很高效的诱导细菌进入VBNC状态。不同水质情况下,温度对细菌的诱导不同;在纯净水与矿物质水中,高温更易诱导细菌进入VBNC状态;在矿泉水中,低温更易诱导细菌进入VBNC状态。不同的灭菌方式对痢疾志贺氏菌进入VBNC状态的诱导有差异,高压灭菌的灭菌方式更易诱导细菌进入VBNC状态。 矿泉水环境最不利于细菌的生存,其次是矿物质水,最后是纯净水。在矿泉水中,尤其高温环境下细菌更偏向于死亡而非进入VBNC状态。纯净水中细菌更易进入VBNC状态而非死亡。 根据显微镜下细菌的状态变化认为细菌进入VBNC状态是一个过程而非突然的状态转折。推测细菌处于VBNC状态的时间并不是无限的,VBNC状态应该是细胞维持生存的一个亚健康状态,是抗拒死亡但又更接近死亡的一种生理状态。