第一部分CMTM4在脓毒症T淋巴细胞中的表达及功能研究目的 抗炎/促炎失衡、免疫功能紊乱是脓毒症重要发病机制,适应性免疫系统缺陷、免疫抑制是患者预后差的主要原因,为探究脓毒症免疫机制的重中之重。脓毒症适应性免疫缺陷的主要特征是T淋巴细胞受损、耗竭,表现为细胞数量减少、凋亡增加、功能减弱。已有研究证明人趋化素样因子超家族成员CMTM4在肿瘤疾病中与负性调控因子存在相互作用,负向调节T细胞功能致肿瘤免疫逃逸,但目前尚无任何有关CMTM4在脓毒症中的研究。本研究①将探索CMTM4在脓毒症T淋巴细胞中的表达水平及对脓毒症T细胞免疫功能的影响,为今后研究人员探究脓毒症免疫发病机制抛砖引玉,为脓毒症临床诊治提供新思路。方法（1）根据2016年脓毒症指南Sepsis 3.0诊断脓毒症患者,抽取患者确诊时的外周血,记录血常规及炎性因子检查结果,同时采集健康志愿者外周血,利用淋巴细胞分离液体外分离人外周血淋巴细胞,CD3+磁珠分选T淋巴细胞;RT-qPCR检测正常组与脓毒症组CMTM4基因水平表达差异;Western Blot检测CMTM4蛋白水平差异。（2）体外培养人急性T细胞白血病Jurkat细胞系,给予LPS刺激制备脓毒症细胞模型,RT-qPCR和Western Blot检测实验组与对照组基因表达差异。（3）小干扰RNA沉默Jurkat细胞CMTM4基因,给予沉默组和对照组细胞LPS刺激后,CCK-8法检测两组细胞增殖情况;PI法检测CMTM4对T细胞周期的影响;Annexin V-FITC法对比LPS处理后沉默组与对照组凋亡比例,判断CMTM4对凋亡的影响;ELISA法检测IL-2与IL-10水平变化。（4）CLP法制备脓毒症小鼠模型,设置CLP组与假手术组,于6h、12h、24h处死,取小鼠外周免疫器官脾、腹腔淋巴结标本,RT-qPCR和Western Blot检测CLP组与假手术组CMTM4表达差异,免疫组化观察CMTM4在组织中的表达情况。结果（1）与健康志愿者相比,CMTM4在脓毒症患者外周血T淋巴细胞中基因和蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）。（2）LPS刺激Jurkat细胞得到的脓毒症细胞模型与空白对照组相比,CMTM4在RNA和蛋白水平表达均升高（P<0.05）。（3）siRNAs沉默Jurkat细胞CMTM4基因后再给予si-CMTM4组和si-NC组两组细胞LPS刺激6h、12h、24h,探究CMTM4对脓毒症T细胞功能的影响,发现si-CMTM4组细胞增殖功能强于si-NC组,si-CMTM4组细胞进入生长周期S期的比例明显高于si-NC组,si-NC组细胞停滞于G1期的比例高于si-CMTM4组（P<0.05）;si-CMTM4组经过LPS刺激后,发生凋亡的比例明显低于si-NC组（P<0.05）,细胞存活比例更高;另外,si-CMTM4组细胞上清中IL-2与IL-10浓度均高于si-NC组（P<0.05）。（4）CLP小鼠模型实验中,与假手术组相比,脾、腹腔淋巴结组织CMTM4表达量在RNA和蛋白水平上均有所升高（P<0.05）,形态学上免疫组化结果显示组织内CMTM4含量增高。结论（1）人趋化素样因子超家族成员CMTM4在脓毒症外周血T淋巴细胞中表达增强。（2）CMTM4在脓毒症小鼠外周免疫器官中表达升高。（3）CMTM4对脓毒症T细胞具有免疫抑制作用,具体表现为抑制T细胞增殖能力、影响细胞周期、促进细胞凋亡、抑制T细胞分泌炎性因子。因此,我们认为CMTM4干预T淋巴细胞生物学功能,参与脓毒症免疫紊乱机制,CMTM4高表达导致T细胞免疫功能受抑制,抑制机体获得性免疫功能。第二部分淋巴细胞相关比值NLR、PLR预测脓毒症心肌损伤的临床价值目的 Sepsis 3.0指出脓毒症是机体对感染失调导致的威胁生命的器官功能障碍,强调免疫紊乱和器官损伤在疾病中的重要地位,其中获得性免疫是重中之重,具有复杂亚群的淋巴细胞既参与免疫活化又参与免疫抑制,不仅影响免疫状态,亦参与器官损伤的发生,如何将机体免疫与器官损伤相关指标相联合以提高预测效能已为众多研究者所关注。研究涉及的淋巴细胞相关指标一一中性粒细胞/淋巴细胞比值（neutrophil/lymphocyte ratio,NLR）、血小板/淋巴细胞比值（platelet/lymphocyte ratio,PLR）把参与脓毒症的重要炎症细胞中性粒细胞、淋巴细胞和血小板相结合,反映免疫/免疫、免疫/凝血间关系,本研究围绕脓毒症心肌损伤探索免疫指标NLR、PLR值是否对脓毒症造成的靶器官损害具有诊断及预测价值,希望供临床识别脓毒症心肌损伤所借鉴。方法 连续纳入2017-1至2019-8收治于北京大学人民医院ICU病房的142例脓毒症患者,进行回顾性队列研究。记录患者一般资料和既往史,采集脓毒症时血常规指标（NEU,LYM,PLT）计算 NLR、PLR 值;CRP;入 ICU 24h 内 APACHE Ⅱ 评分及心肌酶谱。根据cTnl值将患者分为两组——非心肌损伤组74例和心肌损伤组68例;独立样本t检验分析两组间差异;Spearman法判断NLR、PLR值与心肌损伤标志物相关性;Logistic回归法分析脓毒症患者发生心肌损伤的独立危险因素;ROC曲线评估NLR、PLR值对脓毒症患者心肌损伤的预测价值。结果 心肌损伤组NLR值与正常组相比明显增高,PLR降低（P<0.05）。Spearman相关分析示脓毒症患者NLR与CRP呈正相关（r=0.604,P<0.05）,PLR与BNP呈负相关（r=-0.884,P<0.05）。Logistic回归结果示NLR、PLR与BNP均为脓毒症患者心肌损伤的独立危险因素（P<0.05）。ROC曲线结果示NLR、PLR对应的AUC分别为0.799、0.750,两者对脓毒症患者心肌损伤均有一定预测价值（P<0.001）。结论 NLR、PLR对脓毒症患者发生心肌损伤均有一定预测价值,其中NLR预测价值更大。