免疫抑制剂对酵母多糖诱导的HaCaT细胞TLR2/Dectin-1信号通路影响

来源 :湖北医药学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shengyue1212
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
背景:随着免疫抑制剂的广泛使用,皮肤真菌感染的发病率也逐渐增高,但是其具体机制是什么呢?我们推测与机体的天然免疫功能受到抑制有关,天然免疫作为机体抵御外界病原体的第一道防线,在抗真菌感染方面发挥着重要的作用,但是相关研究目前较罕见。所以本实验通过构建体外真菌感染的模型,从天然免疫方面研究长期使用免疫抑制剂易导致真菌感染发病率增高的原因及其具体机制。目的:本实验用酵母多糖诱导Ha Ca T细胞,构建体外真菌感染的细胞模型;检测3种常见的免疫抑制剂环孢素A、环磷酰胺、麦考酚酸酯对正常的和酵母多糖诱导的Ha Ca T细胞Dectin-1、TLR2以及炎症因子TNF-α、IL-6的表达变化,从细胞水平来探讨不同免疫抑制剂、皮肤真菌感染与模式识别受体之间的关联。方法:第一部分:体外培养HaCaT细胞,用不同浓度(0、10、100μg/ml)酵母多糖作用于Ha Ca T细胞24 h,采用荧光定量聚合酶链反应、流式细胞术的方法,检测Ha Ca T细胞中Dectin-1、TLR2m RNA以及蛋白水平的变化,用酶联免疫吸附试验,检测细胞上清液中的TNF-α、IL-6浓度变化,以及细胞爬片免疫荧光染色的方法观察Dectin-1、TLR2蛋白在Ha Ca T细胞中的表达部位。第二部分:体外培养HaCaT细胞,用CCK-8的方法检测不同浓度(100 nM、1μM、10μM、100μM、500μM)的环磷酰胺、环孢素A和不同浓度(10 n M、100n M、1μM、10μM、50μM)的麦考酚酸酯作用Ha Ca T细胞24 h后的生长抑制率,选取最适浓度进行后续实验,用相应浓度的药物刺激Ha Ca T细胞24 h,采用荧光定量聚合酶链反应、流式细胞术的方法检测细胞中Dectin-1、TLR2的m RNA以及蛋白水平的变化,酶联免疫吸附试验的方法验检测上清液中TNF-α、IL-6的浓度变化。第三部分:选取100μg/ml浓度的酵母多糖和相应浓度的免疫抑制剂与Ha Ca T细胞共同培养24h,采用荧光定量聚合酶链反应、流式细胞术的方法检测细胞中Dectin-1、TLR2 m RNA以及蛋白水平的变化,酶联免疫吸附试验的方法验检测细胞上清液中TNF-α、IL-6浓度的变化。结果:第一部分:酵母多糖作用于HaCaT细胞后Dectin-1、TLR2 m RNA和蛋白表达水平均增高(P<0.05),TNF-α、IL-6水平也增高(P<0.05),且呈浓度依赖性,在酵母多糖的刺激下Dectin-1、TLR2蛋白的表达向胞核内转移。第二部分:不同浓度的环磷酰胺、环孢素A、麦考酚酸酯作用Ha Ca T细胞24h后,均对Ha Ca T细胞表现出一定的抑制作用(P<0.05),且随着药物浓度增加其抑制作用越大。因为生长抑制率过高和过低的意义不大,所以环孢素A和环磷酰胺最终选取的相浓度为1μM,麦考酚酸酯的最终浓度为100 n M,进行后续的实验。与对照组相比,环磷酰胺作用于Ha Ca T细胞后TLR2、Dectin-1m RNA和蛋白的表达水平增高,TNF-α、IL-6的水平也升高,但差异无统计学意义(P>0.05);与对照组相比,环孢素A和麦考酚酸酯作用于Ha Ca T细胞后,TLR2、Dectin-1m RNA及蛋白水平均降低(P<0.05),TNF-α、IL-6的浓度也降低(P<0.05),差异有统计学意义。第三部分:与对照组比较,环磷酰胺作用于酵母多糖诱导的HaCaT细胞后,TLR2、Dectin-1m RNA和炎症因子表达水平降低,但差异无统计学意义(P>0.05),而环孢素、麦考酚酸酯有统计学意义;与对照组相比,麦考酚酸酯和环孢素A、环磷酰胺作用于酵母多糖诱导的Ha Ca T细胞后,TLR2、Dectin-1蛋白表达水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05);结论:1.酵母多糖能够激活Ha Ca T细胞中TLR2、Dectin-1的表达,诱导细胞天然免疫的发生;2.环磷酰胺、环孢素A以及麦考酚酸酯对HaCaT细胞的生长具有抑制作用和毒性作用,且与浓度呈正相关;3.麦考酚酸酯、环孢素A对正常的和酵母多糖诱导的Ha Ca T细胞TLR2、Dectin-1及TNF-α、IL-6的表达具有抑制作用,我们推测麦考酚酸酯、环孢素A可能通过TLR2/Dectin-1的信号通路来抑制机体的天然免疫;4.环磷酰胺对正常的和酵母多糖诱导的Ha Ca T细胞TLR2、Dectin-1及TNF-α、IL-6的表达无明显作用,我们推测环磷酰胺可能通过其他的信号通路来抑制机体的天然免疫功能;
其他文献
近四十年,随着我国经济快速发展所带来的空气污染问题日益严重,由此诱发的各种呼吸道疾病越来越多。空气中的可吸入颗粒物尤其是PM2.5(可入肺颗粒物)吸入人体肺部后,运动到肺
[目的]研究亚临床甲状腺功能减退的不孕女性卵巢颗粒细胞的分泌功能。通过探究亚甲减不孕女性卵巢颗粒细胞上TSHR、FSHR、CYP19A1的表达变化,进而探讨TSH对于颗粒细胞分泌功
基因组岛是基因组中的特定区域片段,与水平基因转移密切相关,具有特殊的结构,常常携带致病、耐药及与适应性等功能相关的基因。基因组岛在不同物种之间移动,造成了相关基因的
细胞凋亡受基因的调节,能有序有效地清除DNA损伤引起的或正常发育过程中出现的受损细胞,从而阻止肿瘤生长。当细胞凋亡失调,细胞增殖不受控制时,细胞会癌变。因此,细胞凋亡失
[目的]探讨分离手术与分离手术联合椎体成形+125I粒子植入术治疗MESCC患者的可行性及临床效果。[方法]研究分析自2017年11月至2019年06月在云南省肿瘤医院(昆明医科大学第三
自石墨烯问世以来,硅烯、锗烯、黑磷等二维纳米材料成为了物理、材料、化学等领域的研究热点。其中,二维黑磷的成功制备极大地启发了人们对第VA族其他二维材料的探索热情。目前,人们预测砷烯和锑烯将会因其恰当的能隙与高稳定性在蓝光探测器、LED以及激光器等方面具有重要的潜在应用。对于砷烯和锑烯而言,材料尺度对其催化活性、禁带宽度以及磁性性能等都会产生较大的影响,但传统的经典理论模型对阐释这一尺寸效应的物理机
精密单点定位(Precise Point Positioning,PPP)是全球导航卫星系统(Global Navigation Satellite System,GNSS)的重要应用之一。而今,随着多导航系统时代的来临,多系统融合精
目的:应用深度增强成像OCT扫描图像,通过自编图形分析软件程序结合OCT系统软件,测量分析儿童、青少年脉络膜厚度。研究方法:随机招募20例(40眼)健康志愿者,利用海德堡OCT-EDI
目的:评价茵陈术附汤加减方治疗慢性心力衰竭合并高胆红素血症的临床疗效,为临床应用茵陈术附汤加减方治疗慢性心力衰竭合并高胆红素血症提供理论支撑与临床论证。方法:采用
目的:运用循证医学的方法比较肾上腺切除术与是守治疗对肾上腺偶发瘤(Adrenal incidentalomas,AI)伴亚临床库欣综合征(Subclinical Cushing′s syndrome,SCS)授谢结果的影响