人参皂苷C-K具有抗癌、保肝等功效。它在天然的人参中并不存在,是原人参二醇类皂苷在肠道内的降解产物,sp.48和sp.848菌发酵产生的人参皂苷Ⅰ型酶能在体外水解PPD生成C-K。本论文主要研究了两种不同来源的人参皂苷Ⅰ型酶水解单体Rb1、Rc、Rd、F2、Rg3等PPD皂苷的酶反应动力学,并大量制备了单体人参皂苷C-K。以人参总皂苷为原料,采用大孔吸附树脂和硅胶柱层析法分离得到酶反应底物单体皂苷Rb1、Rc、Rd,得率分别为32.0%、15.2%、25.5%。经高效液相色谱检测其纯度分别为96.5%、81.7%和94.9%。采用离子DEAE交换层析法分离纯化了微生物sp.48 人参皂苷Ⅰ型酶,在SDS-PAGE中呈现单带,其分子量约为74kDa。HPLC进一步验证了其纯度和分子量。人参诱导sp.48菌所产生的人参皂昔Ⅰ型酶,对底物Rb1、Rc、Rd、F2、Rg3的Km值分别为 0.621、0.928、0.158、0.227、0.0170 mM,Vm 值分别为 14.6、20.7、7.38、8.14、0.557 rmmol/Lmin;豆粕诱导sp.848所产生的酶,对底物Rb1、Rc、Rd、F2、Rg3的Km值分别为 0.720、0.809、0.110、0.203、0.0170 mM,V 值分别为 14.6、27.0、5.02、7.15、0.854 mmol/L min。两种不同来源的酶水解同种底物的差异不大,同种底物的反应速度基本相同。通过定性分析,比较底物反应速度,人参皂苷Ⅰ型酶对不同单体皂苷的反应速度为Rc>Rb1>F2>Rd>Rb2>Rb3>Rg3。反应进行到24h后,酶反应达到动力学平衡,其转化率随时间变化不大。sp.848菌产酶水解40.0g PPD底物得到C-K粗产品,测得其含量为68.9%;用AB-8大孔吸附树脂洗脱时,用40.0%、60.0%、70.0%、84.0%梯度洗脱AB-8大孔吸附树脂的效果较好,能够达到初步分离的目的,D296脱色后C-K得率为67.6%;再用硅胶柱层析法对粗产品提纯,得到单体人参皂苷C-K和F2,其纯度分别为93.1%和80.3%,得率分别为26.5%、17.3%;最后用结晶法精制C-K,其纯度达到98.9%。,得率为98.3%。