论文部分内容阅读
牛瑟氏泰勒虫病是由泰勒科、泰勒属的瑟氏泰勒虫(Theileria sergenti)寄生于牛体内引起的一种血液原虫病。近些年，瑟氏泰勒虫病的发生呈上升趋势，且疫区内本病的发病率和致死率均较高，给相关国家的畜牧业带来了较大的经济损失，引起了国内外兽医界的广泛关注。牛瑟氏泰勒虫(T. sergenti)P33蛋白是T. sergenti的主要虫体表面蛋白之一，具有很好的免疫原性。牛瑟氏泰勒虫(T. sergenti)P33主要表面蛋白基因序列中的C末端有疏水的膜固着点，N末端有信号肽序列。本研究根据GenBank牛瑟氏泰勒虫P33主要表面蛋白基因设计了一对引物，利用全血基因组DNA提取试剂盒提取了牛瑟氏泰勒虫全血基因组DNA，用PCR技术扩增和克隆了大小为786 bp的P33主要表面蛋白基因的部分片断，对所克隆的P33基因序列与基因库中已发表的序列进行比较分析。结果表明同源性达99％，证明该基因片段确为牛瑟氏泰勒虫P33主要表面蛋白基因。将P33主要表面蛋白基因与pET-28a(+)载体进行连接，经酶切鉴定和PCR鉴定，证明成功构建了含有目的基因片段的原核表达载体pET-28a-P33。然后将构建好的原核表达载体pET-28a-P33，在1m mol／L的IPTG诱导下，在大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态中得到了高效表达，当4h时表达量达到高峰。所表达出来的P33融合蛋白分子量约为30.3ku，其表达量占菌体总蛋白的43％，以包涵体形式存在，并对所表达蛋白进行了Western blotting检测。结果，该蛋白可被牛瑟氏泰勒虫阳性血清识别，表明该融合蛋白具有较好的反应原性。