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目的天山雪莲为新疆特色维吾尔药材,临床疗效显著。本实验进行天山雪莲及雪莲注射液的药学与药动学研究,为天山雪莲的进一步深入开发提供相关理论数据。方法1参照中国药典2010版一部天山雪莲药材项下检查内容对10批次天山雪莲药材进行质量评价,以主要检测成分芦丁、绿原酸和紫丁香苷含量最高者为主要研究对象。静态吸附考察5种大孔吸附树脂对天山雪莲中主要活性成分芦丁、绿原酸和紫丁香苷的吸附与解析情况,确定最佳树脂类型,并考察了最大上样量、上样溶液浓度、上样流速、洗脱溶剂与用量、洗脱流速等参数。采用透析袋法研究天山雪莲提取物的透膜特性,以释放介质中不同时间点中芦丁、绿原酸与紫丁香苷的含量为依据,计算累积释放量与累积释放率,绘制累积释放曲线。研究天山雪莲提取物的透膜特性,为进一步制备天山雪莲黏膜给药系统提供相关数据。2采用HPLC-UV法测定天山雪莲提取物与雪莲注射液中3种主要活性成分芦丁、绿原酸和紫丁香苷的含量,并分别建立了天山雪莲提取物与雪莲注射液的指纹图谱。通过比较天山雪莲提取物与雪莲注射液的指纹图谱,进行二者的相关性研究,可为进一步改进雪莲注射液的制备工艺提供参照。3采用LC-MS/MS建立同时检测大鼠体内芦丁、绿原酸与紫丁香苷的方法,并进行方法学验证,包括特异性、标准曲线和定量下限、精密度与准确度、稳定性、提取回收率与基质效应。采用LC-MS/MS进行雪莲注射液大鼠腹腔注射后主要活性成分芦丁、绿原酸与紫丁香苷在体内的药代动力学研究,获得相关的药动学参数。结果1 10批次天山雪莲药材均符合药典项下各种相关规定,其中以和静县2012年采集的天山雪莲药材中主要检测成分芦丁、绿原酸和紫丁香苷含量最高,故以其作为主要研究对象。天山雪莲提取物的最佳富集工艺为:选择X-5大孔树脂进行富集,上样液浓度为50mg/mL,上样量为3BV,上样流速为3BV/h,先用3BV水冲洗,再用20%乙醇6BV、40%乙醇5BV进行梯度洗脱,洗脱流速为3BV/h,合并收集20%、40%乙醇洗脱液,干燥后,得到天山雪莲提取物。透析袋法实验结果表明天山雪莲提取物中绿原酸与紫丁香苷释放速度相对较快,1h后累积释放率分别为43.57%,47.12%;4h累积释放率分别为88.39%,86.04%;12h累积释放率分别为96.52%,98.28%。芦丁在1h累积释放率为30.74%,4h累积释放率达到69.07%,12h累积释放率为94.86%。天山雪莲提取物透膜速度较为缓慢。2采用HPLC-UV法可使天山雪莲提取物与雪莲注射液中各成分可达到分离,获得10批次天山雪莲提取物与10批次雪莲注射液的相关色谱图,并输入到国家药典委员会制定的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2004 A版)中,进行各自的共有峰匹配和相似度分析,结果10批次天山雪莲提取物与10批次雪莲注射液各自的相似度均大于0.9,符合相关要求,分别建立了天山雪莲提取物和雪莲注射液各自的指纹图谱。通过天山雪莲提取物与雪莲注射液指纹图谱的对比分析,发现天山雪莲提取物中其主要活性成分含量较高,杂质相对较少。而雪莲注射液中主要活性成分含量相对较低,杂质相对较多。故可采用天山雪莲提取物为基础进行雪莲注射液的工艺改进,有可能得到新的天山雪莲制剂。3采用LC-MS/MS法同时检测大鼠体内芦丁、绿原酸与紫丁香苷的含量,本方法特异性良好,血浆中的内源性物质对待测三种主要活性成分与内标物的色谱峰均没有干扰。三种主要活性成分芦丁、绿原酸和紫丁香苷在大鼠空白血浆中呈现良好线性关系;大鼠血浆中芦丁、绿原酸和紫丁香苷3种成分的线性范围分别为 1ng/mL～1000ng/mL、1ng/mL～2000ng/mL、5ng/mL～1000ng/mL;三种成分的定量下限分别为:1 ng/mL、Ing/mL、5 ng/mL。各成分的线性方程相关系数均大于0.99。在精密度和准确度考察中,其低浓度QC样品的批内及批间精密度(RSD)均<20%;中、高两个浓度QC样品的批内与批间精密度(RSD)均<15%;低、中、高三个浓度QC样品的准确度(RR)均在85?115%的范围内。在稳定性考察中,三种主要活性成分的低、中、高三个浓度含药血浆的准确度(RR)均在85?115%的范围内,能够保证检测结果的准确度和稳定性。三种主要活性成分与内标物的提取回收率与基质效应均符合要求。本检测方法可用于大鼠体内芦丁、绿原酸与紫丁香苷的含量测定。雪莲注射液大鼠腹腔注射后,芦丁、绿原酸与紫丁香苷的Tmax均为30min,体内浓度下降缓慢。芦丁与绿原酸的MRT均在3h左右,消除较为迅速;而紫丁香苷的MRT在8h左右,消除较为缓慢。通过对相关的药动学数据进行分析,发现雪莲注射液中主要活性成分芦丁、绿原酸和紫丁香苷在体内吸收很快,疗效迅速。结论1通过指纹图谱研究与主要活性成分含量测定对天山雪莲提取物与雪莲注射液进行了质量控制,分析了雪莲注射液与天山雪莲提取物的相关性。采用透析袋法研究天山雪莲提取物的透膜特性,为天山雪莲黏膜给药系统的研究提供数据。2建立了 LC-MS/MS同时测定大鼠血浆中的芦丁、绿原酸和紫丁香苷的方法,并进行方法学验证,结果表明方法可行。3进行雪莲注射液腹腔注射后主要活性成分体内药动学研究,获得相关的药动学参数,为其临床应用提供相关的依据。