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流感病毒血凝素(hemagglutinin, HA)位于流感病毒包膜上,在流感病毒吸附和穿入宿主细胞的过程中起着重要作用。HA是流感病毒最主要的表面抗原,它能够诱导机体产生相应的中和抗体以中和病毒。HA一般含有五个抗原决定簇,流感病毒的流行与其抗原结构的变化密切相关。已有研究表明,流感病毒HA基因DNA疫苗能够保护小鼠抗致死量流感病毒攻击。为了进一步了解HA基因抗流感的关键序列,本实验用PCR的方法分别从5′端或3′端对A/PR/8/34流感病毒HA基因(全长1701bp)和B/Ibaraki/2/85流感病毒HA基因(全长1758bp)进行部分缺失,构建了一系列编码部分缺失片段的质粒,将这些质粒用肌肉注射的办法免疫小鼠,免疫后的小鼠分别用致死量A/PR/8/34流感病毒或B/Ibaraki/2/85流感病毒攻击,通过观察小鼠的存活率、血清中保护性抗体水平和肺部病毒量来寻找HA基因抗流感的关键序列。 实验结果表明:(1)A型流感病毒HA基因从5′端缺失12个核苷酸或从3′端缺失882个核苷酸,编码缺失片段的质粒就不能保护小鼠抗致死量流感病毒攻击:而从5′端缺失6个核苷酸或从3′端缺失876个核苷酸,编码缺失片段的质粒仍然可以保护小鼠抗致死量流感病毒攻击。(2)B型流感病毒HA基因从5′端缺失15个核苷酸或从3′端缺失888个核苷酸,编码缺失片段的质粒就不能保护小鼠抗致死量流感病毒攻击;而从5′端缺失6个核苷酸或从3′端缺失882个核苷酸,编码缺失片段的质粒仍然可以保护小鼠抗致死量流感病毒攻击。这意味着在核酸疫苗的研究中,我们可以用不到全长序列一半的关键序列代替全序列,减少一些非必需序列的干扰。