【摘 要】
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为了探讨骨碎补及其主要有效成分柚皮苷对机体骨骼代谢的影响,本研究采取二次酶消化法,以新生24 h大鼠的颅骨为材料分离培养成骨细胞,经形态观察(瑞氏染色)、ALP染色和钙化结节(
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为了探讨骨碎补及其主要有效成分柚皮苷对机体骨骼代谢的影响,本研究采取二次酶消化法,以新生24 h大鼠的颅骨为材料分离培养成骨细胞,经形态观察(瑞氏染色)、ALP染色和钙化结节(茜素红、Von Kossa)染色鉴定后,进行传代培养。以细胞培养液中不加药物的试验组作为空白对照,采用MTT法、PNPP法及酶联免疫吸附测定法(ELISA)分别检测不同浓度的骨碎补水提液(10mg/mL、1 mg/mL、1.0×10<-1>mg/mL、1.0×10<-2>mg/mL、1.0×10<-3>mg/mL、1.0×10<-4>mg/mL、1.0×10<-5>mg/mL)及柚皮苷(1.0×10<-4>mol/L、1.0×10<-5>mol/L、1.0×10<-6>mol/L、1.0×10<-7>mol/L)对体外培养的大鼠第三代成骨细胞增殖、分化功能及细胞分泌IGF-I水平的影响。结果表明:
1.骨碎补水提液及柚皮苷分别作用于体外培养的大鼠成骨细胞48 h和72 h后,二者能明显促进成骨细胞的增殖。作用48 h,较高浓度的骨碎补水提液组和柚皮苷组对成骨细胞有较强的促增殖作用;作用72 h,骨碎补水提液和柚皮苷各浓度组均能显著促进成骨细胞增殖,其作用比48 h佳。
2.骨碎补水提液和柚皮苷作用于体外培养的大鼠成骨细胞48 h后,与对照组相比,中浓度(1.0×10<-3>mg/mL、1.0×10<-2>mg/mL)的骨碎补水提液能够使成骨细胞ALP活性显著升高(P<0.05),从而促进成骨细胞的分化,但各柚皮苷试验组无此作用。
3.骨碎补水提液及柚皮苷作用于体外培养的大鼠成骨细胞72 h后,各试验组均使细胞分泌IGF-I的水平降低。其中,1.0×10<-7>mol/L、1.0×10<-4>mol/L柚皮苷试验组和10 mg/mL骨碎补试验组与对照组相比,差异显著(P<0.05);1.0×10<-3>mol/L柚皮苷试验组与对照组相比,差异极显著(P<0.01)。
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