对虾白斑综合症病毒(white spot syndrome virus, WSSV)是一种具有囊膜的、无包涵体的、类杆状双链环状DNA病毒,是危害对虾养殖的主要病原之一,对世界对虾养殖业造成了严重的损失。细菌双杂交系统是新近建立的一种研究蛋白质间相互作用的方法。应用细菌双杂交系统,我们分别以pBT、pTRG诱饵质粒构建编码WSSV基因组DNA随机片段的融合表达质粒pBT-wssv、pTRG-wssv。重组质粒共转化双杂交报告菌株XLl-Blue MRF′,通过LB-TCK平板筛选对虾白斑综合症病毒中相互作用的蛋白质。本研究中我们构建了WSSV基因组细菌双杂交系统,为该病毒功能基因组的研究打下良好的基础。我们已经报道了一种简便而有效地从感染螯虾组织中大量提取和纯化完整WSSV病毒粒子的方法,为结构蛋白的鉴定打下一个良好的基础。对虾白斑综合症病毒核衣壳蛋白VP664是至今知道的分子量最大的结构蛋白,全长18,234bp,预计编码6,077个氨基酸。从编码VP664基因的两端各选600 bp,分别命名为vp664n、vp664c。分别将vp664n、vp664c克隆到pET-His表达载体,以E. coli XL1-Blue为宿主菌,成功表达、纯化了目的蛋白并制备抗体。Western blot实验中蛋白特异抗体只与完整的病毒和核衣壳裂解蛋白中的VP664反应,而不和膜蛋白反应,证明VP664所编码的蛋白在完整病毒颗粒上定位于核衣壳。实验中从对虾白斑综合症病毒(WSSV)基因组中克隆到一个基因,它编码一个膜蛋白VP41A。利用DNA重组技术表达和纯化了重组蛋白VP41A,通过Ni-琼脂糖珠结合下拉实验研究发现了一个蛋白质可能与VP41A有相互作用的蛋白质,再经过Nano-ESI-MS/MS质谱分析,该蛋白可能是一个细胞粘连蛋白,说明VP41A蛋白有可能在病毒感染宿主细胞过程中起重要作用。本论文开展了病毒核衣壳蛋白以及可能与病毒复制或调控相关的蛋白基因的研究,有利于揭示WSSV入侵的分子途径,探索病毒复制或转录的关键蛋白,为最终建立有效的防治方法提供有力的科学依据。