鸭疫里默氏杆菌AS87_08785基因编码Ⅸ型分泌系统的功能组分GldK

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鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer)是引起水禽败血症和渗出性疾病的重要致病菌。毒力因子的研究将有助于我们了解该病原菌的致病机制,并制定有效的防控措施。鸭疫里默氏杆菌具有称为IX型分泌系统的蛋白质分泌系统。前期研究中,我们发现AS87_08785基因的缺失显著降低了鸭疫里默氏杆菌Yb2株的细菌毒力,然而,其机制仍然未知。本研究构建并鉴定了鸭疫里默氏杆菌AS87_08785基因突变和互补菌株。序列分析表明,AS87_08785基因编码GldK蛋白,通过蛋白质印迹分析鉴定该蛋白位于细胞膜组分。液相色谱-串联质谱分析显示,在Yb2ΔgldK培养物中不存在具有典型T9SS CTD的四种蛋白质。进一步的测定显示突变菌株Yb2ΔgldK在蛋白质消化中是有缺陷的,支持了这些聚合物消化所涉及的酶由T9SS分泌的观点。互补菌株cYb2ΔgldK恢复蛋白水解活性。突变菌株Yb2ΔgldK在琼脂平板上表现出有缺陷的滑动运动,蛋白酶活性和蛋白质分泌能力降低。转录组测序和qPCR分析表明,突变株Yb2ΔgldK中有13个基因的下调表达。动物实验表明,与野生型Yb2感染的鸭相比,Yb2ΔgldK感染鸭血液中的载菌量显著降低。互补菌株cYb2ΔgldK恢复了大部分缺陷的生物学特性。综上所述,鸭疫里默氏杆菌AS87_08785基因编码IX型分泌系统的关键组分GldK,其作用于细菌滑动运动,蛋白质分泌和细菌毒力。
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