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蜂胶(propolis)是蜜蜂从植物芽孢和树干处采集的树脂,混入蜜蜂上颚腺分泌物和蜂蜡等形成的一种具有芳香味的粘性胶状固形物。研究证实,蜂胶具有抗细菌、抗病毒、抗真菌、抗肿瘤、抗氧化、抗溃疡、抗疲劳、抗过敏、调节免疫、保肝护肝、促进组织再生等广泛的药理作用,医学临床及保健品市场已得到广泛使用,而兽医临床上蜂胶相关研究报道及应用较少。本文研究了蜂胶活性成分的最佳提取精制条件,制备出畜禽用蜂胶口服液,完成了质量控制及稳定性等药学研究。具体内容如下：1蜂胶口服液制备工艺的研究蜂胶活性成分的提取与精制：醇提水沉法。质量控制标准为蜂胶中白杨素、高良姜素、总黄酮的提取率均不小于80%,正交优化确定最佳醇提工艺和水沉条件。完全流程为：取已粉碎过20目的蜂胶粉末100g,加入80%乙醇使蜂胶含量达20%(g/mL),40℃浸提4d,每天至少充分搅拌2次,冷藏(0～4℃)24h,滤过取上清液；冷藏24h,滤过取上清液；以氨水调pH值至8.0～8.5,加入已溶解亚硫酸钠(3g)、乙二胺四乙酸二钠(0.3g)的纯化水,搅拌,至乙醇含量为50%,冷藏(0～4℃)24h,滤过取上清液减压浓缩至稠膏状,备用。蜂胶口服液制备工艺：取以上稠膏,加900mL溶媒(乙醇：丙三醇：稳定剂=7.8：2：0.2),以氨水调pH值至7.5～8.5,滤过,加溶媒至1000mL,灌封,即得。所制10%(每100mL含生药10g)蜂胶提取物口服液,活性成分含量控制标准为：白杨素不得少于1.6mg*mL,高良姜素不得少于0.8mg/mL,总黄酮以芦丁计不得少于12mg/mL；溶媒系统为乙醇：丙三醇：稳定剂=7.8：2：0.2。蜂胶口服液中试生产：三批次各投蜂胶原料10kg,按以上工艺在GMP车间中试生产。结果成品率在95%以上,显示该工艺工业化生产可行,产品质量稳定。2蜂胶口服液质量控制方法的研究《中国药典》2010年版一部以蜂胶中白杨素和高良姜素含量评价其质量。中华人民共和国国家标准——蜂胶正文中,则以蜂胶中总黄酮含量评价其质量。综合考虑以上两个蜂胶国家质量控制标准,对蜂胶口服液的质量控制方法进行了研究。蜂胶口服液中白杨素及高良姜素含量质量控制：薄层色谱法定性及高效液相色谱法定量研究。薄层色谱条件：采用硅胶G薄层板,展开剂为三氯甲烷-甲醇-丁酮(9.4：0.3：0.3),显色剂为三氯化铝试液,置紫外光灯(365nm)下检视。结果供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点；斑点清晰,分离较好,重复性及专属性均良好。高效液相色谱条件：色谱柱为ZORBAX-SB-C18柱(5μm,25cm x4.6mm),流动相为0.15%磷酸溶液-甲醇(36：64),流速为1.0mL·min-1,紫外检测波长为268nm,进样量为20μL,柱温为25℃。白杨素检测浓度线性范围为1-24μg·mL-1,线性方程为：Ar=129998C-19260(R2=0.9997),平均回收率为101.49%(RSD=0.92%,n=6)。高良姜素检测浓度线性范围为1～24μg·mL-1,线性方程为：Ar=73356C-21955(R2=0.9995),平均回收率为100.76%(RSD=I.62%,n=6)。本法操作简便快速,结果准确可靠,重复性较好,可用于测定蜂胶口服液中白杨素及高良姜素的含量。蜂胶口服液中总黄酮含量(以芦丁计)质量控制：紫外分光光度法定量研究。检测波长为360nm,芦丁浓度线性范围为5～25μg·mL-1,线性方程为：A=0.0319C-0.0191(R2=0.9995),平均回收率为100.31%(RSD=0.58%,11=6)。本法操作简便,结果准确,可用于测定蜂胶口服液中总黄酮的含量。3蜂胶口服液的稳定性初步研究按《中国兽药典》2010年版一部要求,考察蜂胶口服液的稳定性。光照影响因素试验,结果显示：与0d相比,光照5、10d口服液性状无变化；5、10d时pH分别下降0.11、0.12；白杨素和高良姜素含量5d时分别下降1.14%、5.80%,而10d时又分别升高6.46%、1.74%；总黄酮含量没有明显变化。40℃加速试验显示：0、1、2、3月制剂的性状、pH、鉴别及含量均没有明显变化。25℃长期试验显示：0、3月制剂的性状、pH、鉴别及含量也没有明显变化。