论文部分内容阅读
雄-4-烯-3,17-双酮(4AD)是甾体激素类药物的重要中间体,其羟基化产物具有极其重要的医药价值。甾体药物的生物催化羟基化反应是工业上生产甾体激素类药物的重要手段,而寻找优良高效的新型微生物和开发新的甾体激素药物仍然是未来发展方向。本论文以4AD为研究对象,筛选能特异性催化4AD羟基化的菌株并对其羟基化产物进行鉴定,初步考察雄烯二酮羟基化工艺。经摇瓶培养和投料转化,筛选出具有4AD羟基化能力的4株丝状真菌:斜卧青霉(Penicillium decumbens)、菌种 TCCC 41667(strain TCCC 41667)、雷斯青霉(Penicillium raistrickii)和赭曲霉(Aspergillus ochraceus),并对菌种 TCCC 41667 采用形态学特征和18S rDNA基因序列系统发育分析进行鉴定,发现菌种TCCC 41667为曲霉属。采用质谱、核磁共振波谱及X-射线晶体衍射分析等谱学方法对转化产物进行结构鉴定。4AD经斜卧青霉转化生成1α-羟基-4AD和1α,6β-双羟基-4AD;曲霉TCCC41667和雷斯青霉的转化产物均为15α-羟基-4AD;赭曲霉催化雄烯二酮生成11α-羟基-4AD。其中,1α-轻基-4AD和1α,6β-双羟基-4AD作为甾体生物羟基化产物在相关文献中未见报道,这将拓展斜卧青霉应用范围,为发现更多甾体羟基化产物奠定基础,在甾体药物新药研发中具有重要意义。考察不同的转化条件对4AD转化过程中不同产物积累的影响,结果表明,培养基中碳源蔗糖有利于斜卧青霉转化过程中1α,6β-双羟基-4AD的积累(发酵液中百分含量为59.4%),而氮源酵母粉有利于1α-羟基-4AD(发酵液中百分含量为71%)的积累。在曲霉TCCC 41667转化过程中,碳源麦芽糖可有效提高15α-羟基-4AD的产量(发酵液中百分含量为70.4%)。