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目的:采用中医症状证候量表与内分泌、糖代谢检测结合的方式评价针刺治疗多囊卵巢综合征合并胰岛素抵抗的临床疗效,从PI3K/AKT/FoxO1信号通路探讨针刺的作用机制,以期为针刺治疗多囊卵巢综合征合并胰岛素抵抗提供临床及实验室依据。方法:本次研究分为临床研究和动物实验两部分。（1）临床研究将符合纳入标准的108例脾肾亏虚,痰湿互结型多囊卵巢综合征合并胰岛素抵抗（polycystic ovarian syndrome-Insulin Resistance,PCOS-IR）受试者随机分为健康指导组（n=36）、针刺组（n=36）和二甲双胍组（n=36）。针刺组每周电针两次,取关元、三阴交、肾俞、丰隆四穴,每次30分钟,频率2赫兹。二甲双胍组口服二甲双胍片。健康指导组采取运动和饮食干预。治疗周期均为三个月①采用化学发光免疫分析法测定受试者治疗前后的性激素六项评价内分泌改善情况。②采用全自动生化分析仪测定肝肾功能、血脂、葡萄糖耐量,采用化学发光免疫分析法测定胰岛素释放,评价治疗前后糖、脂代谢改善情况。③采用中医症状证候量表评价治疗前后中医症状证候变化。④采用超声检查受试者小卵泡数评价治疗前后多囊卵巢的典型临床表现改善情况。⑤通过测定受试者身体质量指数（Body Mass Index,BMI）、腰臀比（Waist Hip Ratio,WHR）、月经周期（Menstrual Cycle,MC）、妊娠率、痤疮、多毛症FG（Ferriman-Galwey,FG）评分,评价治疗前后多囊卵巢的典型临床表现改善情况。（2）动物实验将42只大鼠随机分为模型组（n=6）、针刺组（n=6）、激动剂组（n=6）、抑制剂组（n=6）、针刺+激动剂组（n=6）、针刺+抑制剂组（n=6）和空白组（n=6）。除空白组外,其余组均予来曲唑灌胃,高糖高脂饮食制备PCOS-IR大鼠模型。空白组、模型组常规抓取,其余组于造模结束后第二天进行相应干预:针刺组采用电针每周两次,取关元、三阴交、肾俞、丰隆四穴,每次30分钟,频率2赫兹;激动剂组:740Y-P腹腔注射5umol/kg/天;抑制剂组:Wortmannin腹腔注射1mg/kg/天;针刺+激动剂组:给予激动剂的同时再针刺;针刺+抑制剂组:给予抑制剂的同时再针刺。均连续干预28天。干预结束后进行各项指标检测:（1）通过大鼠阴道涂片变化评价针刺对动情周期的调节作用。（2）通过大鼠卵巢组织病理切片HE染色法评价针刺对大鼠卵巢局部的影响。（3）通过ELISA（enzyme linked immunosorbent assay）法测定大鼠血清性激素评价针刺对大鼠性激素的影响。（4）通过ELISA法测定大鼠血清胰岛素和葡萄糖代谢评价针刺对糖代谢的影响。（5）通过免疫组化法观察大鼠卵巢组织叉头框蛋白O1（forkhead box protein O1,FoxO1）蛋白表达分析针刺对FoxO1表达的影响。（6）通过实时荧光定量聚合酶链式反应（Quantitative Real-time polymerase chain reaction,RT-PCR）测定大鼠卵巢颗粒细胞中磷脂酰肌醇-3激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）、丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶（serine-threonine protein kinase,AKT）、FoxO1的信使核糖核酸（messenger ribonucleic acid,mRNA）表达,分析针刺对PI3K、AKT、FoxO1的调节效应。结果:（1）临床研究本次临床研究共纳入108例,其中脱落0例,剔除0例,最终有效病例108例。研究结束后5例妊娠（针刺组3例,分别出现在治疗结束后14天和20天以及25天。二甲双胍组2例,分别出现在治疗结束后14天和21天）。治疗前,三组患者在肝肾功能、血脂、内分泌、胰岛素释放和葡萄糖耐量、BMI、WHR、FG评分、痤疮、MC、妊娠率方面无统计学差异（P＞0.05）。针刺组的总有效率为86.11%,二甲双胍组为52.78%,健康指导组为5.56%。与二甲双胍和健康指导组比,针刺组最有效,差异有统计学意义（P＜0.001）。1.三组患者治疗前后内分泌的比较:与治疗前比较,治疗后针刺组、二甲双胍组的睾酮（Testosterone,T）、脱氢表雄酮（dehydroepiandrosterone,DHEAS）、黄体生成素（Luteinizing Hormone,LH）明显下降,差异有统计学意义均（P＜0.05）。与健康指导组比较,针刺组、二甲双胍组T、DHEAS、LH均降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。针刺组T低于二甲双胍组,差异有统计学意义（P＜0.05）。2.三组患者治疗前后糖代谢的比较:与治疗前比较,治疗后针刺组治疗后胰岛素0’（Insulin,INS）INS0’有下降,差异有统计学意义（P＜0.05）,针刺组和二甲双胍组治疗后INS120’、稳态模型胰岛素抵抗指数（Homeostasis Model Assessment-Insulin Resistance,HOMA-IR）明显下降,差异有统计学意义（P＜0.05）。与健康指导组比较,针刺组、二甲双胍组的INS120’、HOMA-IR均低于空白组,差异有统计学意义均（P＜0.05）。3.三组患者治疗前后PCOS-IR典型临床症状的比较:与治疗前比较,治疗后针刺组MC缩短,小卵泡数减少,差异有统计学意义（P＜0.05）。与治疗前相比,针刺和二甲双胍组BMI有明显下降,差异有统计学意义均（P＜0.05）。针刺治疗后对面色无华或萎黄、腰膝酸软、性欲减退、白带清稀、头晕耳鸣有改善作用,差异有统计学意义均（P＜0.05）。与健康指导组比较,针刺组MC缩短、小卵泡减少,面色无华或萎黄改善,差异有统计学意义（P＜0.05）。（2）动物实验建模后,模型组大鼠体重增幅大于空白组,比较有统计学差异（P＜0.05）。大鼠阴道涂片多为白细胞为主,提示处于动情间期,失去排卵功能。模型组空腹胰岛素（fasting insulin,FINS）、空腹血糖（fasting blood glucose,FBG）、HOMA-IR、LH、T均高于空白组,差异有统计学意义（P＜0.001）。病理切片模型组明显呈多囊样改变,符合模型要求。2干预后,（1）各组大鼠阴道涂片的比较:针刺组、针刺+激动剂组、激动剂组、空白组见上皮细胞核膨大而消失,角化上皮细胞聚笼成片,空白组最明显,针刺和激动剂组次之。模型组、抑制剂组、针刺+抑制剂组见白细胞较多分布,抑制剂组白细胞最多。（2）各组大鼠卵巢组织病理切片的比较:针刺组、针刺+激动剂组、激动剂组、空白组见卵泡,形态规则,直径适中,颗粒细胞排列紧密,空白组最明显,针刺组和针刺+激动剂组次之。模型组、抑制剂组、针刺+抑制剂组卵泡呈囊性,形态不规则,颗粒细胞稀疏,抑制剂组最明显。（3）各组大鼠体重、卵巢子宫质量的比较:与针刺+抑制剂组、抑制剂组、模型组相比,针刺+激动剂组体重增幅少,差异有统计学意义（P＜0.05）。针刺组体重低于模型组、抑制剂组、针刺+抑制剂组,差异有统计学意义（P＜0.05）。针刺组卵巢质量低于针刺+抑制剂组、抑制剂组,差异有统计学意义（P＜0.05）。针刺组卵巢质量比针刺+激动剂组高,差异有统计学意义（P＜0.05）。针刺组子宫质量比抑制剂组高,差异有统计学意义（P＜0.05）。（4）各组大鼠内分泌指标的比较:针刺+激动剂组比抑制剂组、模型组的T低,差异有统计学意义（P＜0.05）。（5）各组大鼠糖代谢指标的比较:针刺组的INS120’比模型组低（P＜0.05）。（6）各组大鼠干预后卵巢组织FoxO1蛋白的表达比较:各组大鼠卵巢颗粒细胞均有FoxO1表达。空白组、针刺组、激动剂组、针刺+激动剂组FoxO1在细胞核内分布依次减少,细胞质显色较深。模型组、抑制剂组、针刺+抑制剂组FoxO1在细胞核内分布依次增多。（7）各组大鼠干预后卵巢组织PI3K、AKT、FoxO1的mRNA表达的比较:模型组的PI3K表达低于针刺组,差异有统计学意义（P＜0.05）。与针刺+激动剂组相比,模型组、激动剂组的AKT表达较低,差异有统计学意义均（P＜0.05）。与针刺组比,针刺+抑制剂组的AKT表达较低,差异有统计学意义均（P＜0.05）。与针刺+抑制剂组比,针刺组FoxO1的表达较高,差异有统计学意义均（P＜0.05）。模型组的FoxO1表达比针刺组低,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:（一）临床研究1.针刺能降低脾肾亏虚,痰湿互结型PCOS-IR受试者外周血雄激素、黄体生成素及胰岛素水平。2.针刺能改善PCOS-IR的典型临床症状:缩短月经周期、降低BMI、减少小卵泡数及改善中医症状证候。（二）动物实验1.针刺能改善PCOS-IR模型大鼠的雄激素及胰岛素水平,降低体重和体重增幅,增加子宫重量,减少卵巢重量,改善卵巢多囊的状态。2.针刺可能通过PI3K/AKT/FoxO1信号通路,激活卵巢颗粒细胞PI3K、AKT的表达,使FoxO1转录失活,表达受抑,从而降低雄激素、胰岛素的分泌,最终调节PCOS-IR内分泌紊乱的状态。