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目的:探究清热解毒凉血方对慢加急性肝损伤小鼠模型的疗效及其作用机制。方法:1.选用50只雄性C57BL/6小鼠,随机分为八组(A-D;E-H),每组6-7只,A组给予高脂饮食(HFD)3个月;B、C组给予腹腔注射10%的CCL4 2ml/kg,一周2次,分别持续8周、12周;D组实施胆道结扎(BDL),持续2周;E组在A组基础上灌胃53%乙醇一次剂量;F组在B组的基础上给予LPS 100ug/kg联合D-gal 400mg/kg;G组在C组的基础上,给予同等剂量LPS与D-gal;H组在D组基础上,给予同等剂量LPS、D-gal。化学氧化法测定Tbil;双抗体夹心酶联免疫吸附法检测小鼠血清ALT、AST的活力以及IL-6、TNF-α的表达水平;HE及天狼猩红染色观察肝脏组织病理变化。2.选用36只雄性C57BL/6小鼠,随机分为正常组(N)、中药组(CM+CCL4+LPS+D-gal)、西药组(WM+CCL4+LPS+D-gal)和模型组(CCL4+LPS+D-gal-3h/CCL4+LPS+D-gal-12h/CCL4+LPS+D-gal-24h),每组 6 只。除正常组外,其他组均腹腔注射10%CCL4 2ml/kg,一周3次,共8周,于最后一次给予LPS 0.5mg/kg联合D-gal 400mg/kg,模型组给予LPS与D-gal后于3h、12h、24h分别处死小鼠。中药组及西药组在小鼠腹腔注射10%CCL4(2ml/kg)4周后,开始灌胃中药/西药,持续4周,于最后一次给予LPS 0.5mg/kg联合D-gal 400mg/kg,3h后处死小鼠;双抗体夹心酶联免疫吸附法检测小鼠血清ALT、AST的活力;多因子检测法测定小鼠血清中炎症因子(TNF-α、GM-CSF、IL-1β、MCP-1、IL-10、IL-17A、IL-1α、IL-12P70、IFN-γ、IL-27、IL-6、IFN-β);HE 及天狼猩红染色观察肝组织病理变化;免疫荧光法观察F4/80、CD11b;免疫组化法观察MPO的表达;Western blot测定CD44、ICAM-1、HMGB1的表达情况。结果:1.比较并确立慢加急性肝损伤小鼠模型:E组(HFD+Alc.)病理示轻度肝纤维以及轻度炎性细胞浸润与轻度肝损伤;H组(BDL+LPS+D-gal)示大量炎性细胞浸润,且存在亚大块坏死,ALT、AST、Tbil均显著升高(P<0.0001),然而在BDL过程中出现小鼠死亡现象(2/7);F 组(CCL4-8w+LPS+D-gal)与 G 组(CCL4-12w+LPS+D-gal)结果示明显的肝纤维化形成且肝细胞坏死严重,在慢性肝损伤过程中,未见小鼠死亡现象。F组(CCL4-8w+LPS+D-gal)与G组(CCL4-12w+LPS+D-gal)相比,随着给予CCL4次数越多,ALT、AST表达水平显著升高(P<0.01;P<0.001),血清中IL-6、TNF-α表达明显增加(P<0.001;P<0.05),HE染色示肝组织病理损伤也更为严重。2.清热解毒凉血方防治慢加急性肝损伤小鼠模型的疗效及其机制的研究:与正常组相比,模型组血清中可见ALT、AST水平明显升高(P<0.001),炎症因子GM-CSF、IFN-γ、IFN-β、IL-1α、IL-6、TNF-α、IL-10、MCP-1、IL-17A、IL-1β、IL-27表达均升高(P<0.05);小鼠肝组织中MPO浸润情况以及F4/80、CD11b表达均升高;CD44、ICAM-1、HMGB1表达显著增加(P<0.05)。与模型组相比,西药组血清中ALT、AST、GM-CSF、IFN-γ、IFN-β表达均明显降低(P<0.05)。与模型组相比,中药组小鼠血清中IL-17A表达升高(P<0.01),ALT、AST、TNF-α、GM-CSF、IL-10、IL-1β、MCP-1、IFN-γ 表达降低(P<0.05);小鼠肝组织中 MPO、CD44、ICAM-1、HMGB1 表达均降低(P<0.05);而 F4/80、CD11b 表达升高。与西药组相比,中药组血清中TNF-α、IL-1β、MCP-1、IL-10、IL-6表达均降低(P<0.05)。结论:1、建立慢加急性肝损伤小鼠模型可采用腹腔注射10%CCL4(一周3次,持续8周)联合 LPS(0.5mg/kg)与 D-gal(400mg/kg)的方法。2、清热解毒凉血方能够降低慢加急性肝损伤小鼠模型血清中ALT、AST,改善肝损伤,同时具有降低炎症因子的作用。3、清热解毒凉血方可升高慢加急性肝损伤小鼠模型的F4/80、CD11b的表达,降低IL-1β、ICAM-1、IL-10、CD44、MPO以及HMGB1的表达。表明清热解毒凉血方可能通过调节中性粒细胞与Kupffer细胞改善肝损伤,其具体机制有待进一步探究。