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干巴菌属于担子菌亚门、层菌纲、非褶菌目、革菌科、革菌属菇类,含有丰富营养成分,但目前关于其生物活性成分的研究较少。本课题以干巴菌子实体为研究对象,分别从小分子活性物质的分离提取、结构鉴定、抗氧化活性、抑制HIV-1整合酶活性等几个方面对其进行研究。
本研究使用90%乙醇(v/v)室温浸提干巴菌子实体,提取物C依次经大孔树脂NKA、聚酰胺色谱柱及C18 HPLC逐级分离纯化,得到活性物质A4F1。接着经定性实验、质谱、核磁共振、红外光谱等鉴定方法证实,A4F1是一种未被发现的多酚类物质,分子式为C25H20O12,分子量为513.0630:其化学结构母核为对三联苯,其中2个相邻苯环通过酚羟基缩合形成1个呋喃环,且苯环上的氢原子分别被4个酚羟基、3个甲氧基、2个乙酰氧基取代。
抗氧化活性检测结果显示:当A4F1终浓度至25μg/ml时,其仍具有88.5%的鼠脑匀浆脂质过氧化抑制活性;当其终浓度到50μg/ml时,A4F1还具有86.8%的红细胞溶血抑制活性;同时,A4F1对DPPH自由基也具有清除能力,其EC50=22.7μM。构效分析推断,对三联苯类物质的抗氧化活性与其结构中的酚羟基的数量、相对位置及呋喃环有关:A4F1结构中含有4个酚羟基,其中3个为邻位,具有这样结构的多酚类物质的抗氧化活性普遍较高;并且A4F1结构中含有1个呋喃环,而呋喃环则有利于电子的传递,从而使化合物具有较强的抗氧化及自由基清除活性。
同时,A4F1对HIV-1整合酶切割活性也具有抑制作用,其IC50=35.3μM。本研究探讨了A4F1抑制HIV-1整合酶可能的作用机制,排除了A4F1通过作用于体系中金属离子起到抑制活性的可能性,推断A4F1可能是通过直接与HIV-1整合酶作用而产生的抑制活性。
综上,本课题的研究意义在于:筛选菇类中高效的抗氧化、抗HIV-1整合酶的天然小分子活性物质;探索小分子物质生物活性的构效关系,推测了其可能的活性基团和作用机制,为治疗艾滋病药物的先导化合物开发奠定基础。