重组杆状病毒介导的人组织激肽释放酶在昆虫细胞中的表达

来源 :扬州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zh_engxu
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
昆虫杆状病毒表达系统是应用广泛的外源蛋白表达系统。该系统利用杆状病毒多角体蛋白基因的强启动子,不仅重组蛋白的产量高,而且具有真核细胞的蛋白质翻译后修饰加工机制,重组蛋白的生物活性较强。 本研究用高保真PCR,从已被证明能在真核细胞中正确表达的重组载体中扩增人组织激肽释放酶cDNA,引入适当的酶切位点和组氨酸纯化标签后,与杆状病毒转移载体pFastBacl连接,用获得的重组载体pFastBac-KLK1转化含穿梭载体Bacmid的DH10Bac大肠杆菌,筛选获得了重组质粒Bacmid-KIK1;再将Bacmid-KLK1转染Sf9昆虫细胞,获得了重组杆状病毒;经3次传代后经间接免疫荧光检测证明,重组病毒感染的昆虫细胞中为重组人组织激肽释放酶表达阳性,经western blot检测证明表达产物的分子量为预期的35kDa,大部分存在于胞浆内。这些研究结果为人组织激肽释放酶检测试剂的研制和开发利用奠定了基础。
其他文献
施工导流标准的选择贯穿水利水电工程建设全过程,是施工总进度安排的主要影响因素。它既影响导流工程的造价,又影响主体工程的施工安全及工期。 影响施工导流风险的不确定性
学位
边坡稳定问题是水利水电工程中常见的问题之一,在我国以前的水利水电工程建设中,库区、坝区滑坡事故多次发生,造成了大量人员伤亡和重大经济损失。随着国家“西部大开发”、“西
学位
学位
在水泵输水系统中,泵站水力过渡过程(亦称泵站水锤现象)经常发生,产生泵站水锤的原因很多,如工作人员操作失误、事故停机以及自然灾害等。水锤对泵站工程的正常运行影响很大,不少