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近年来,毛细管电泳技术(CE)因其样品需要量少、分离效率高、分离时间短、操作简便、运行成本低等优点,已成为目前分析化学领域中发展最快的分离技术之一,在化学、生命科学和制药等领域都有广泛的应用。
本论文主要目的是灵活运用毛细管电泳技术中的毛细管区带电泳(CZE)和毛细管胶束电动色谱(MEKC)分离模式,对蛋白质多肽、血管组织样品和农药等不同种类的被测样品建立高分离选择性、高灵敏度、快速简便的分离分析方法。全文包括以下几个方面:
第一章从MEKC的准固定相种类及其应用、MEKC的在线富集技术和检测方法这三个方面对MEKC近年来的进展进行了评述。
第二章发展了一种MEKC和部分填充毛细管胶束电动色谱(PF-MEKC)技术中应用由两性离子型表面活性剂PAPS与非离子型表面活性剂Brij35组成的混合胶束在酸性条件下对蛋白质进行肽谱分析的方法。该方法以牛血清白蛋白(BSA)的胰蛋白酶酶解液为样品进行分离分析。在PF-MEKC方法中,经过对实验条件各参数的考察,最终作为假固定相的胶束溶液被优化为含有32 mM PAPS和0.6%(m/v)Brij35的50 mMNH4COOH(pH2.0)。该混合胶束体系对蛋白质肽段具有很高的分离选择性,这可能是因为两性离子表面活性剂所形成的胶束与肽段之间发生了离子对效应。
第三章发展了一种新的用于血管组织中锁链素(DES)和异锁链素(IDES)的分离和定量分析的毛细管胶束电动色谱法。混合胶束由PAPS和Brij35所形成。在优化后的含有40 mM PAPS和O.5%(m/v)Brij-35的50 mM Tris—H3PO4(pH2.5)的缓冲溶液条件下,对血管组织样品中的DES和IDES表现出高的分离选择性,不仅将DES和IDES成功地从血管组织样品所含的复杂基质组分中分离了出来,而且DES和IDES之间也达到了完全的基线分离,DES和IDES的最低检测量(LOQ)分别为3.00×10-6mol/L和2.75×10-6mol/L。DES和IDES迁移时间和校正峰面积的日内和日间相对标准偏差均小于1.7%。
第四章利用有机磷类和氨基甲酸酯类农药对乙酰胆碱酯酶(AChE)酶活性的不可逆抑制作用和基于电泳介导的微分析技术,建立了一种快速、高灵敏度、重复性好的间接测定痕量有机磷类和氨基甲酸酯类农药含量的毛细管电泳方法。该方法在优化条件下对硫磷、三唑磷、灭多威、克百威四种农药的最低检出限(LOD)在0.01~20 ug/L范围内,该方法检测灵敏度高、准确可靠。
第五章利用水/油微乳液法成功制备了一类包裹有荧光素的荧光团杂化纳米二氧化硅粒子,实验所制得的荧光团杂化纳米二氧化硅粒子,受到激发后发出较强的绿色荧光,直径为60 nm,具有较好的匀一性。通过硅烷化反应对荧光团杂化纳米二氧化硅粒子的表面成功进行了氨基修饰,元素分析结果表明对粒子的氨基修饰也成功完成。