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目的：近年来大量研究证实嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells, OECs)与神经干细胞(neural stem cells, NSCs)联合移植治疗中枢神经损伤具有显著疗效。但细胞移植后,NSCs向神经元分化效率低是制约细胞移植疗效的因素之一。本实验拟在体外运用热预处理的方法提高OECs条件培养基诱导NSCs向神经元分化比例,并探讨对OECs热预处理促进NSCs向神经元分化的机制。方法：新生3d昆明小鼠,提取嗅球,分离、培养嗅鞘细胞并鉴定,再将纯化的OECs分为3组。370EC组：无血清条件培养基下OECs置于37℃培养48h；400EC组：无血清条件培养基下OECs置于40℃培养箱预处理6h,再置于37℃培养42h；400EC+R组：在OECs无血清条件培养基里加入20μg低氧诱导因子-1α(HIF-1a)抑制剂(YC-1),于40℃培养箱预处理6h,再置于37℃培养42h。MTT法检测预处理后OECs细胞活力。收集各组OEC上清液(OCM),标记为370CM,400CM,400CM+R。取P3代小鼠神经干细胞系C17.2细胞,培养至80%细胞融合,清除含血清培养基后分别加入三组OEC上清液,通过免疫荧光计数、Western-blot方法检测C17.2NSCs向神经元分化比例情况,并用RT-PCR、Western-blot和ELISA方法分别检测OECs及OCM中HIF-1a及其靶基因EPO、VEGF表达。结果：MTT细胞活力检测示3组OECs的细胞活力无显著差异。NSCs在加入370CM组、400CM组和400CM+R组上清液诱导后,通过免疫荧光计数发现,400CM组中分化细胞神经元标志物β微管蛋白(β-tublinⅢ, Tuj-1)、微管相关蛋白2(microtubule-associated protein2, MAP-2)阳性细胞数目(31.40±1.08%、31.80±1.60%)显著高于370CM组(23.60±1.36%、22.80±1.66%)和400CM+R组(22.60±1.50%、24.00±2.30%),370CM与400CM+R两组之间Tuj-1、MAP-2阳性细胞数目无统计学差异。Western-blot也证实,在400CM诱导组中,Tuj-1蛋白表达显著高于370CM组和400CM+R组,而370CM和400CM+R两组之间Tuj-1、MAP-2蛋白表达无显著差异。RT-PCR结果示400EC组HIF-1a及其下游靶基因EPO、VEGF转录水平较370EC.400EC+R组明显增高；Western blot结果提示400EC组HIF-1a蛋白表达含量显著高于370EC、400EC+R组；Elisa检测发现400CM组中EPO、VEGF含量显著高于370CM、400CM+R组。结论：OECs经热预处理后,其上清液能更有效的诱导NSCs向神经元定向分化,提高其分化比例。热预处理后HIF-1a表达上调是促进NSCs向神经元定向分化的重要因素,HIF-1a下游靶基因EPO、VEGF激活和表达可能是提高NSCs向神经元分化比例的机制之一。