响应面法优化三角梅组织培养及印度梨形孢对其生长的影响研究

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三角梅(Bougainvillea)隶属紫茉莉科(Nyctaginaceae)常绿攀缘型灌木。因其生命力顽强、抗虫抗病、花色丰富多彩,引种以来就在我国南方广泛种植,主要应用于园林景观和城市绿化。但其独特的花器结构,导致三角梅授粉困难,又因传统无性繁殖效率低下,因此难以满足市场日益增长的苗木需求。有关三角梅组织培养快繁殖技术方面的研究很少,所以本试验在前人研究的基础上,通过响应面法对三角梅组织培养体系进行了优化,从体外消毒接种到诱导生根移栽成活,建立了较完善的组织培养体系,为三角梅组培工厂化提供了理论依据和技术基础。本研究结果如下:在采取外植体之前,先提前一周用多菌灵喷洒母株,然后在超净工作台下使用5%洗衣粉溶液和细毛刷清除表面绒毛,浸泡5次,每次5分钟。最后在实验台上用75%酒精消毒30s,4%次氯酸钠浸泡9min,消毒时往消毒剂中添加0.1%吐温,消毒效果最好;腋芽诱导阶段,最佳诱导培养基为MS+6-BA 2.534mg/L+NAA 0.1mg/L,诱导出芽率为93.3%;最佳增殖培养基为MS+2.0mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA,芽的增殖系数达4.48;其最佳壮苗培养基为MS+0.5mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA;通过响应面法分析MS组分、NAA和IBA对三角梅生根的影响,结果表明三者之间MS对生根影响最大,IBA影响最小。三者之间,MS和IBA浓度的交互作用影响显著,MS和NAA浓度的交互作用影响显著,IBA与NAA之间无交互作用。经验证后得到最佳生根培养基0.66MS+IBA 2mg/L+NAA 0.09mg/L;最后将三角梅组培苗,放在温室大棚中经炼苗后,移栽到营养土:蛭石:珍珠岩(3:1:1)为基质的花盆中,一个月后成活率为95%,移栽四个月后三角梅组培苗开始开花。印度梨形孢(Piriformospora indica)是一种发现于印度沙漠中的真菌,其功能与作用类似AFM(Arbuscularmycorrhizal fungi)真菌,但其寄生范围更大,且能在人工培养基上进行繁殖。印度梨形孢定殖在根系后,具有能促进植物生长、提高抗胁迫能力、提高幼苗移栽成活率和提高产量等作用。本试验通过浇灌法,将印度梨形孢定殖在三角梅根部。在接种后的4个月时间内,对三角梅幼苗株高、株径、最大叶长、最大叶宽、最大叶面积、茎粗和叶数的进行统计分析发现,接种印度梨形孢后显著促进三角梅生长,表现为处理组的株高、叶数、茎粗和鲜重均显著高于对照组。根据三角梅幼苗四个月的生长趋势发现,印度梨形孢对其生长促进作用在幼苗时期效果更显著;对其根系结构分析后发现,接种后的三角梅幼苗在初期的根系总长度、根系体积、根系表面积和根系分根数都显著高于对照组;在叶绿素含量方面,接种后的三角梅植株叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素均极显著(P<0.01)高于对照组;在叶绿素荧光参数方面,F0和Fv/Fm与对照组有极显著差异(P<0.01),ΦPSⅡ和q P则与对照组有显著(P<0.05)差异。通过统计处理组和对照组的开花率,发现接种印度梨形孢后,处理组的开花率显著高于对照组(P<0.01)。这表明接种印度梨形孢后提高了三角梅叶片内色素含量,增强了其的光合作用能力,促进了三角梅提早开花,对三角梅具有促进生长的作用。
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