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胃肠道肿瘤如胃癌、大肠癌、结肠癌等是世界范围内最常见的恶性肿瘤,我国是胃肠道肿瘤高发区。早期肿瘤手术切除为主,辅以化疗,晚期则以化疗为主,可见化疗是肿瘤治疗中占有重要地位。目前在临床治疗中,5-氟尿嘧啶(5-Fu)与铂类药物作为一线化疗药物被广泛应用。不同患者对相同化疗方案的反应性不同,预后也存在差异,说明不同患者对化疗的敏感性不同。造成这种化疗敏感性差异的重要原因之一是遗传变异,这种个体基因的遗传多态性可改变化疗药物作用的关键酶的表达及其生物学活性,从而调节化疗药物代谢与作用靶点的功能,最终影响个体对化疗的反应。随着肿瘤对化疗药物耐药性的出现,寻找能够衡量肿瘤对化疗药物敏感度的标记物和如何逆转肿瘤耐药逐渐成为研究的热点。胸苷酸合成酶基因(thymidylatesynthase, TYMS)和切除修复交叉互补基因1(excision repair cross-complementing1,ERCC1)是最早引起人们关注的肿瘤化疗敏感基因,其多态性与肿瘤化疗药物代谢密切关联。国内外大量报道证实TYMS基因5’端非编码区增强子区域存在一个28bp的串联重复序列,根据此序列的重复次数,主要分为重复两次的2R型和重复3次的3R型,最常见的基因型为3R/3R,2R/3R和2R/2R,由于不同的基因型TYMS mRNA的稳定性不同,表达的蛋白产物的量也不一样,因此造成携带不同基因型TYMS的个体对5氟尿嘧啶(5-Fu)反应性存在差异。ERCC1基因表达产物可以修复铂类化疗药物引起的DNA损伤,但是,如果ERCC1基因第4外显子的118位密码子中出现由C→T碱基的突变(C118T), ERCC1蛋白的表达量就会下降,从而增强铂类化疗药物对肿瘤的杀伤作用。目前,临床上对于化疗敏感基因检测多采用肿瘤组织标本,但患者病程存在个体差异,可能存在不适合进行手术切除等原因,导致肿瘤组织比较难以获得。并且,组织在提取核酸过程中有很多的影响因素,对目的基因多态性的检测存在一定的局限性。因此,寻求一种方便易取的标本类型检测肿瘤化疗敏感基因多态性迫在眉睫,这对肿瘤患者个体化治疗方案的制定将有重要的理论和实践意义。近年来有研究报道,在大肠癌、直结肠癌等消化道肿瘤患者外周血中检测到TYMS和ERCC1基因多态性,但是,对于胃癌患者外周血中是否能够检测到TYMS合ERCC1基因多态性,以及这些基因多态性是否与胃癌组织中存在一致性,目前尚不清楚。本研究首先检测胃癌患者肿瘤组织与外周血中TYMS和ERCC1基因多态性,研究此两种基因在肿瘤组织与外周血中的多态性是否一致,探究外周血基因多态性检测代替组织检测的可行性,在此基础上,收集经5-Fu和铂类药物化疗的消化道肿瘤如大肠癌、胃癌、结肠癌等患者外周血,研究外周血TYMS基因与ERCC1基因多态性在评估肿瘤患者化疗疗效中的作用,为肿瘤患者个体化治疗提供一个简便的实验室评估检测指标。方法1.实验分组：(1)未化疗患者标本分组：收集43例未经化疗胃癌患者术前抗凝外周血及肿瘤组织,将其分为外周血组与肿瘤组织组。(2)化疗患者标本分组：收集76例采用5-Fu和铂类药物进行化疗的肿瘤患者的外周血,按照实体肿瘤的疗效评价标准(RECIST)对化疗患者的近期疗效进行评价,分为化疗有效组与无效组,有效组包括完全缓解(CR)和部分缓解(PR)例数,无效组包括病情无变化(SD)和病情恶化(PD)例数。2.应用PCR法和限制性片段长度多态性聚合酶连式反应(PCR-RFLP)法分别检测外周血与肿瘤组织中TYMS和ERCC1基因的基因型。3.应用SPSS17.0软件进行统计分析,所得资料均用样本例数表示,Spearman法进行样本组间相关性分析,两组问的比较用卡方连续校正法检验,Fisher精确检验法分析基因型与化疗疗效的关系,双侧检验。以P<0.05为差异有统计学意义。结果1.TYMS和ERCC1基因各基因型与胃癌患者临床病理因素无显著相关(P>0.05)。2.未化疗患者外周血与肿瘤组织中TYMS基因3R/3R、(2R/2R、2R/3R)基因型检出率均为72.09%(31/43)、27.91%(12/46),差别有统计学意义(P<0.01)；ERCC1基因C/C、(T/T、C/T)基因型检出率均为81.39%(35/43)、18.61%(8/43),差别有统计学意义(P<0.01)。3.按照RECIST标准对化疗患者的近期疗效进行评价,CRO例,PR24例,SD18例,PD34例。4.化疗患者中TYMS基因3R/3R、(2R/2R、2R/3R)基因型检出率分别为65.79%(50/76)、34.21%(26/76)。携带3R/3R基因型的患者共50例,其中CRO例、PR9例、SD14例、PD27例,化疗有效组9例,无效组41例,化疗有效率为18%(9/50)；携带(2R/2R、2R/3R)基因型的患者共26例,其中CRO例、PR15例、SD4例、PD7例,化疗有效组15例,无效组11例,化疗有效率为57.69%(15/26),经统计学分析,有显著相关性(F=14.53,P<O.05)。5.化疗患者ERCC1基因C/C、(T/T、C/T)基因型检出率分别为中63.16%(48/76)、36.85%(28/76)。携带C/C基因型的患者共48例,其中CRO例、PR23例、SD10例、PD15例,化疗有效组23例,无效组25例,化疗有效率为47.91%(23/48)；携带(T/T、C/T)基因型的患者共28例,其中CRO例、PR1例、SD8例、PD19例,化疗有效组1例,无效组27例,化疗有效率为3.57%(1/28)。经统计学分析,有显著相关性(F=19.89,P<0.05)。结论1.未化疗胃癌患者外周血和肿瘤组织中TYMS与ERCC1基因各基因型检出率一致,表明外周血标本检测可替代肿瘤组织检测TYMS和ERCC1基因多态性。2.在5-Fu化疗过程中,携带TYMS基因2R/2R或2R/3R基因型的患者疗效良好,携带3R/3R基因型的患者疗效不佳,表明外周血中TYMS基因多态性可用于评估5-Fu的疗效。3.在铂类药物的化疗过程中,携带ERCC1基因C/C基因型的患者疗效良好,携T/T或T/C基因型的患者疗效不佳,表明外周血中ERCC1基因多态性可用于评估铂类药物的疗效。